痰液中分泌型IgE概述

SIgE的產(chǎn)生部位與SIgA相似，由呼吸道黏膜固有層中的漿細胞產(chǎn)生，分布于黏膜組織及外分泌液中，這些產(chǎn)生部位正是過敏原的侵入門戶和過敏反應(yīng)好發(fā)部位。 ELISA的原理是基于抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體保持其免疫學(xué)活性，抗原或抗體的酶結(jié)合物既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量有直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高，故可極大的放大反應(yīng)的結(jié)果，從而使測定方法達到很高的敏感度。 

• 檢查部位 頭部
• 科室 內(nèi)科
• 相關(guān)疾病 支氣管炎
• 相關(guān)癥狀 咳嗽 干咳

痰液中分泌型IgE正常值

• 0.1-9mg/L。 

痰液中分泌型IgE臨床意義

• IgE是單體，8S，19×104 ku，其重鏈較γ鏈長。多一個功能區(qū)(CH4)，借此可與細胞(如肥大細胞、嗜堿性粒細胞)結(jié)合，在一定條件下觸發(fā)細胞內(nèi)生物活性物質(zhì)釋放，故稱IgE是引起Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的主要抗體。支氣管哮喘及過敏性肺炎患者，其痰中SIgE含量可增高。 

痰液中分泌型IgE檢查方法

• ELISA為多反應(yīng)、多試劑、多步驟的檢驗方法，必須嚴格按照要求細心謹慎操作，否則得不到準確的結(jié)果。用于檢測不同項目的ELISA操作雖略有差別，但均包括加樣、保溫、洗滌、比色等步驟，以下敘述各步驟的操作要點。
  (1)試劑準備：按試劑盒說明書要求，稀釋或配制試驗中需要的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)該用pH計測量。從冰箱取出的試驗用試劑溫度應(yīng)達到室溫后使用。在用HRP作為標記物的試驗中，不可用被金屬污染的容器。
  (2)加樣：按要求準備包被好的ELISA板。血清(劃體液)標本應(yīng)該是新鮮采集的或在冰箱中妥善保存的，高度溶血或混濁的標本不宜使用。含疊氮鈉作為防腐劑的標本不可用于HRP標記的一步法ELISA。加樣時應(yīng)將標本加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可出現(xiàn)氣泡。定量測定中加樣量的準確度應(yīng)達到定量要求。在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準確性，例如規(guī)定為加樣一滴。此時應(yīng)該使用相同口徑的滴管，并保持正確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。加酶結(jié)合物和加底物的操作和要求與加標本相同。
  (3)保溫：在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標本后和加結(jié)合物后。此時反應(yīng)的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。保溫容器最好是水浴，ELISA板底應(yīng)貼著水中，使溫度迅速平衡。各ELISA板不應(yīng)疊在一起。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋。也可將板平放在底部墊有濕紗布的濕盒中。濕盒應(yīng)該預(yù)溫至規(guī)定的溫度，如用保溫箱保溫，空濕盒的預(yù)溫更為重要。
  (4)洗滌：洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻決定關(guān)著成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中投有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的，因此在ELISA測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。在洗滌液中加入吐溫一類物質(zhì)可提高洗滌的效果。洗滌如不徹底，特別在最后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如標本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標抗體作用而產(chǎn)生干擾。
  ELISA板的洗滌一般采用以下方法;①吸干反應(yīng)液;②將洗滌液注滿板孔;③放置2min，略作搖動;④吸干或傾去孔內(nèi)液后在吸水紙上拍干。洗滌的次數(shù)一般為3～4次，有時甚至需洗5～6次。也可使用板式ELISA自動洗滌儀，但應(yīng)該先檢查儀器的實際使用效果。洗滌儀的每枝吸液管必須同樣貼近相應(yīng)孔的底部。以保證各孔的洗滌效果相同。
  (5)顯色和比色：在定量測定中加入底物后反應(yīng)的溫度和時間仍應(yīng)按規(guī)定力求準確。但在定性測定中反應(yīng)一般可在室溫中進行。如底物為OPD，應(yīng)避光放置。反應(yīng)時間也不需嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照和陰性對照的呈色情況而及時加終止液。為確保各孔的反應(yīng)時間相同，加終止液的程序和速度應(yīng)與加底物液時一致。
  定性測定如陰性反應(yīng)呈色淺淡，有時可用目視判斷結(jié)果。板式ELISA一般均用酶標測讀儀在規(guī)定的波長測讀吸光度。自動酶標測讀儀使用前應(yīng)先測試與所用ELISA板各孔的匹配性和結(jié)果的重復(fù)性。
  比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點，測讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物的孔)和空白孔(以生理鹽水或PBS代替標本作全過程測量的孔)，以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔校零點，測讀標本孔，標準品孔和控制品孔的吸光度。如仍以蒸餾水校零點，在計算時需將以上各孔的吸光度減去空白孔的吸光度。 

痰液中分泌型IgE注意事項

• 1.ELISA中的主要試劑成份如抗原、抗體、酶結(jié)合物、底物等，如制備不當或保存不妥，均易變質(zhì)失活。ELISA的步驟多，操作如不合規(guī)范，難于得到準確的結(jié)果。因此為保證檢測的有效性，每次試驗必須進行質(zhì)量控制。優(yōu)良的試劑盒中提供的陽性對照和陰性對照一般可作為試驗的質(zhì)控品，按其說明操作，從所得的吸光度值可以判斷試驗的有效性。以臨床檢驗中最常用的HBsAg檢測為例，試劑盒中的陰性對照應(yīng)為HBsAg陰性的人血清，陽性對照應(yīng)標明HBsAg含量(例如9±2ng/ml)。每批試驗應(yīng)同時作3份陰性對照和二份陽性對照。陰性對照測定所得吸光度值應(yīng)小于某一數(shù)值(例如0.100)，而陽性對照吸光度均值減去陰性對照吸光度均值應(yīng)大于某一數(shù)值(例如0.200)。這些數(shù)值為該試劑盒在規(guī)定的測定條件下，特定的實驗值。因此如測定結(jié)果符合要求，既表明所用試劑的有效性，又表明操作的正確性，只有在這種情況下，該批試驗方為有效。
  2.有的試劑盒中所含陽性對照和陰性對照不符合作為質(zhì)控品的要求，或?qū)嶒炇业臏y定條件如比色計等，與試劑盒說明中的不同，則應(yīng)根據(jù)實際情況采用合適的質(zhì)控品和從實驗得出的本實驗室的質(zhì)控值。商品的質(zhì)控血清價格昂貴。定性測定ELISA的質(zhì)控品一般可自行制備。仍以HBsAg檢測為例。陰性對照可取自用高質(zhì)量試劑檢測為HBsAg陰性的獻血員。陽性對照的制備可在陰性對照血清中加入適量的HBsAg陽性血清，將此混合血清與參照標準品或定量質(zhì)控品作對比測定，標定其HBsAg含量。然后進行適當?shù)南♂?，得到所需濃度的HBsAg陽性血清，再加入適量抗菌防腐劑如慶大霉霉素和柳硫汞后，分裝低溫凍存。