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血清補(bǔ)體溶解免疫復(fù)合物活性概述
在補(bǔ)體的CRA中,旁路激活途徑(AP)起主導(dǎo)作用,傳統(tǒng)激活途徑僅為促進(jìn)作用。補(bǔ)體CRA的機(jī)制是,在補(bǔ)體與IC相互作用時(shí),AP的C3轉(zhuǎn)化酶大量裂解C3,形成的大量C3b嵌入到抗原抗體的格子狀結(jié)構(gòu)中并牢固與抗體結(jié)合,使部分抗原抗體的結(jié)合鍵斷裂,較大的IC凝聚物變?yōu)檩^小的凝聚物,從而溶解于液相中。
血清補(bǔ)體溶解免疫復(fù)合物活性正常值
(1)酶-抗酶法:正常人CRA(X±SD)為0.38±0.12,正常參考范圍可以為X±2SD即0.14-0.62?!?br /> (2)放射免疫法:成人溶解率正常值為66.0±7.4%。
血清補(bǔ)體溶解免疫復(fù)合物活性臨床意義
患自身免疫病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性活動(dòng)性肝炎、腎小球腎炎等,補(bǔ)體裂解復(fù)合物的能力低下。補(bǔ)體系統(tǒng)正??煞乐共±硇訧C的出現(xiàn)或使IC激活補(bǔ)體引起的炎癥損傷減輕。而補(bǔ)體的先天或后天缺陷及補(bǔ)體系統(tǒng)的激活受阻可能是病理性IC出現(xiàn)的重要原因。
血清補(bǔ)體溶解免疫復(fù)合物活性檢查方法
(1)酶-抗酶法:
①取HRP-抗HRP復(fù)合物0.2ml,加待測(cè)血清0.1ml,置尖底離心管,于37℃水浴1h,時(shí)時(shí)搖動(dòng)混勻。
②加入PBS 1ml,3000r/min,離心15min。
③取上清0.5ml加底物溶液0.4ml,37℃ 1h呈色。加1mol/L NaOH 0.1ml終止反應(yīng),再加入PBS 3ml,測(cè)450nm吸光度。
④用PBS 0.1ml代替待測(cè)血清作為對(duì)照管調(diào)零。
(2)放射免疫法:
①試驗(yàn)組:
A.用含Ca2+、Mg2+明膠巴比妥緩沖液1∶3稀釋待測(cè)血清45μ1,125I BSA-抗BSA復(fù)合物懸液5μl 37℃ 15min加冷PBS(pH7.2 0.15mol/L)1ml。
B.1800r/min離心20min,棄上清,用γ-閃爍計(jì)數(shù)儀測(cè)沉淀cpm。
②對(duì)照組:自然溶解,正常人混合血清56℃滅活30min取45μl。
正常溶解:正常人混合新鮮血清,取45μl。對(duì)照組所加其他試劑同實(shí)驗(yàn)組。
血清補(bǔ)體溶解免疫復(fù)合物活性注意事項(xiàng)
酶-抗酶法:
(1)補(bǔ)體并非對(duì)所有抗原抗體復(fù)合物都溶解,只能溶解可溶性抗原(多糖、蛋白、半抗原等)形成的IC。
(2)其他注意事項(xiàng)同酶免疫技術(shù)節(jié)。