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不孕不育的免疫學(xué)檢查概述
不孕不育的免疫學(xué)檢查包括男性抗精子自身免疫不育、女性抗精子同種免疫不育和女性抗透明帶免疫不育??刂骑嬍常?br />
1、大多數(shù)檢驗(yàn)項(xiàng)目都要求在早晨空腹采血,應(yīng)禁食咖啡、濃茶、高糖及可樂類飲料;
2、肝功、血脂、凝血等項(xiàng)目要求禁食12-16小時(shí),且提前一天的晚餐應(yīng)當(dāng)避免飲酒,禁止高脂肪、高展蛋白飲食;
3、飲食對(duì)血脂檢驗(yàn)影響重大,至少應(yīng)當(dāng)在抽血前的3天以內(nèi)注意保持正常飲食。
不孕不育的免疫學(xué)檢查正常值
各項(xiàng)免疫學(xué)檢查結(jié)果正常為陰性。
不孕不育的免疫學(xué)檢查臨床意義
異常結(jié)果多項(xiàng)免疫學(xué)檢查說明不孕不育。需要檢查的人群男性不育、女性不孕患者。
不孕不育的免疫學(xué)檢查檢查方法
—、抗精子免疫不育的檢查
抗精子免疫包括抗精子體液免疫(抗精子抗體)和抗精子細(xì)胞免疫。
(一)抗精子抗體的檢測(cè)
1.性交后試驗(yàn):于性交后6~24h內(nèi)取宮頸粘液,在高倍鏡下觀察計(jì)數(shù)精子數(shù)。每高倍視野中,有≥21條極度活潑的精子者特異性因素干擾。若血清效價(jià)≥1:32,則可認(rèn)為確含精子抗體。其他尚有毛細(xì)管凝集法及平板凝集法,較少用。
2.補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒試驗(yàn)及精子制動(dòng)試驗(yàn):精子抗體與精子抗原結(jié)合,激活補(bǔ)體系統(tǒng),導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性及完整性的損害,若為制動(dòng)抗體,使精干失去活動(dòng)力,制動(dòng)值≥2為陽性;若為細(xì)胞毒抗體,則用某些染料染色陽性,要求精子活率>70%。微量法僅需樣本幾微升,對(duì)精子活動(dòng)率較低的樣本,可用上游法提取活精子,活率可達(dá)90%以上。奉法僅能檢測(cè)作用于精子尾干的抗體。特異性強(qiáng),敏感性差,假陰性率較高。
3.被動(dòng)血凝法:用精子提取物及精漿包被經(jīng)處理的紅細(xì)胞使之致敏,將致敏紅細(xì)胞與待測(cè)稀釋血清在微量反應(yīng)板上進(jìn)行反應(yīng),出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集為陽性。此法不受精子活率、計(jì)數(shù)、精掖中微生物或組織碎片的影響,研究者認(rèn)為此法特異、敏感,但報(bào)道較少,其可靠性及實(shí)用性尚待證實(shí)。
4.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)及生物素—親合素酶聯(lián)免疫吸附法(BA—ELISA):應(yīng)用完整精干或精子膜抗原包被固相載體,待測(cè)樣本中精子抗體與之培養(yǎng)后可結(jié)合于抗原表面。隨之酶標(biāo)第二抗體亦可結(jié)合其表面,后經(jīng)加酶底物,根據(jù)底物顯色情況判斷結(jié)果??捎萌庋塾^察,亦可用酶標(biāo)儀測(cè)定,后者客觀準(zhǔn)確,一般以大于一組陰性血清光密度均值加2倍標(biāo)準(zhǔn)差為陽性。由于完整精子包被易致非特異性吸附.因此若以可溶性精子膜抗原包被,則本法敏感、特異、客觀、定量,能確定抗體類型,且易操作。BA—ELISA是在常規(guī)ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新一代定量檢測(cè)法,其敏感性、特異性超過常規(guī)法。
5.免疫珠試驗(yàn)(1mmunbead Test,IBT):用抗人免疫球蛋白抗體包被的聚丙烯酰胺微球能結(jié)合于結(jié)合了精子抗體的精子表面,在相差顯微鏡或電子顯微鏡下可見到免疫珠隨精子運(yùn)行,若結(jié)合一個(gè)或多個(gè)免疫珠的精子比例≥lo%為陽性。此法可確定抗體的部位、類型及結(jié)合精子的比例,能測(cè)出活精子表面結(jié)合的抗體。其敏感性、特異性及重復(fù)性較好,操作稍繁瑣,檢測(cè)所需樣本少,可用于宮頸粘液、輸卵管液等微量樣本的檢測(cè)。
6.放射性標(biāo)記免疫球蛋白或A蛋白法:同位素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白或葡萄球苗A蛋白與結(jié)合在精子表面的精子抗體結(jié)合,用x計(jì)數(shù)器測(cè)定精于表面的放射活性。若以活精子作為抗原,其特異性及敏感性較高,且可確定抗體類型。但由于每次實(shí)驗(yàn)活精子來源不同,其結(jié)果重復(fù)性較差;且設(shè)備昂貴.操作者易受放射性損害,故此法報(bào)道較少。
7.間接免疫熒尤試驗(yàn):精于表面結(jié)合于抗原后,能與標(biāo)有熒光素的第二抗體結(jié)合,在熒光顯微鏡下觀察呈現(xiàn)熒光的陽性精子比例。因試驗(yàn)中需要甲醇固定致精于膜損傷,內(nèi)部抗原外露,而抗內(nèi)部抗原的抗體在冗常人中普遍存在,故假陽性太高,無臨床實(shí)用價(jià)值。近年來,作液相培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)過程中無需固定,又重新確定了本法的使用價(jià)值。
8.精卵相互作用直接檢查法
(1)精子—透明帶結(jié)合或穿透試驗(yàn):自腹腔鏡檢查中獲得的人卵與精于在一定條件F孵育后,觀察精子能否穿過透明帶進(jìn)入卵細(xì)胞周圍的空間,若精子不能穿過透明帶,考慮有制動(dòng)抗體存在。此試驗(yàn)亦受其它因素干擾。
(2)精子—去透明帶倉(cāng)鼠卵穿透試驗(yàn)(SPA):將優(yōu)化提取的活精子與無帶倉(cāng)鼠卵混合孵育,在相差顯微鏡下觀察,若卵內(nèi)含腫脹精子頭(帶尾)為已經(jīng)穿透。SPA可用于判定:①有精漿抗體的精子的受精能力;②各種抗體在阻止受孕時(shí)的重要性。此試驗(yàn)也可受多種因素影響。
(二)抗精子細(xì)胞免疫的檢測(cè)
對(duì)細(xì)胞介導(dǎo)的抗精干免疫的研究資料較少,各家結(jié)論不一。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及人體檢測(cè)表明,抗精于細(xì)胞免疫可能是不育的原因之一。檢測(cè)細(xì)胞介導(dǎo)抗精于免疫反應(yīng)的試驗(yàn)主要有淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、白細(xì)胞粘附抑制試驗(yàn)、白細(xì)胞或巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn)、皮膚試驗(yàn)及外周血白細(xì)胞促凝血活性法等。所采用的抗原不一,有新鮮洗滌精子、凍融精子、半純化精于等。目前,因使用的抗原不統(tǒng)一,檢測(cè)方法各異,研究例數(shù)較少,各種方法的特異性尚難評(píng)價(jià),其結(jié)果亦難于比較。
二、抗透明帶免疫性不孕癥的檢測(cè)
人卵透明帶來源有限,很難獲取,但人透明帶與豬透明帶問有交叉抗原性,因此實(shí)際丁作中均用豬透明帶代替人卵透明帶用下檢測(cè)人血清中透明帶抗體。由于部分正常人血清中存在異種凝集素(主要為IgM)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,因此檢測(cè)前需用新鮮豬紅細(xì)胞吸收待測(cè)血清。
1.透明帶沉淀反應(yīng):透明帶表面結(jié)合抗體后,在光鏡或暗視野鏡下呈現(xiàn)折光改變。本法多用于鑒定血清,敏感性低,難用于臨床。
2.放射免疫法:用放射性標(biāo)記的豬透明帶抗原與待測(cè)血清培養(yǎng)后,分離出抗原抗體復(fù)合物,測(cè)定其放射活性。本法能定量,特異性及敏感性較好,但由于放射性損害,且報(bào)道不多,故本法尚難肯定。
3.間接免疫熒光試驗(yàn):人抗透明帶抗體結(jié)合至豬卵表面后,標(biāo)有熒光素的抗人免疫球蛋白抗體隨之結(jié)合至透明帶表面,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)明顯的卵周熒光。本法的可靠性有賴于其它客觀方法證實(shí)。
4.ELISA及BALISA法:以豬透明帶抗原包被固相載體,另加待測(cè)血清、酶標(biāo)第二抗體及底物,分步培養(yǎng)洗滌,最后根據(jù)底物顏色變化情況判斷結(jié)果。本法所需樣本量少,無需特殊設(shè)備,操作簡(jiǎn)便,能定量測(cè)定抗體并確定抗體類型,特異性及敏感性較好。BA—ELISA具有常規(guī)ELISA的優(yōu)點(diǎn),而其敏感性大為提高。
5.被動(dòng)血凝法 用純化的豬透明帶抗原包被其他物種的紅細(xì)胞為抗原靶標(biāo),在存在透明帶抗體的情況下,致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。此法研究報(bào)道較少,難以評(píng)價(jià)其敏感性和特異性。
6.精子—透明帶結(jié)合或穿透試驗(yàn):若存在透明帶抗體或抗精子抗體,此法均可陽性。由于試驗(yàn)受培養(yǎng)環(huán)境因素影響較大,故對(duì)不同實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果難以比較。此法可與其它方法配合應(yīng)用,相互補(bǔ)充,以保證結(jié)果的可靠性。
不孕不育的免疫學(xué)檢查注意事項(xiàng)
不合宜人群:暫時(shí)未明。
檢查前禁忌:
一、采集精子時(shí)要求:
1、留精液前,病人應(yīng)停止性交4~7天。檢查前1周不能用丙酸睪丸酮、苯乙酸睪丸酮、苯丙酸諾龍。檢查前1個(gè)月內(nèi)應(yīng)停止飲酒,這點(diǎn)必須做到。
2、采取精液時(shí),可用軟皂或石蠟油做陰莖按摩,將標(biāo)本收集在無菌的試管中;也可用避孕套(沖洗干凈,不含殺精子藥物)或采用性交中斷法收集精液,但這樣收集的量往往不多。
3、如用上述方法采不到精液,可經(jīng)直腸內(nèi)按摩精囊及輸精管末端、壓迫采尿,檢查沉渣中有無精子。
4、不要將精液暴露在過熱和過冷的環(huán)境中。及時(shí)交給醫(yī)生備查,不得超過30分鐘。冷天要注意保暖,送檢時(shí)可放在內(nèi)衣口袋里保溫。
5、如果要進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),應(yīng)先沖洗、消毒尿道口,再將精液收集在無菌試管中。
二、采集血清前要求:
(一)控制飲食
1、大多數(shù)檢驗(yàn)項(xiàng)目都要求在早晨空腹采血,應(yīng)禁食咖啡、濃茶、高糖及可樂類飲料。
2、肝功、血脂、凝血等項(xiàng)目要求禁食12-16小時(shí),且提前一天的晚餐應(yīng)當(dāng)避免飲酒,禁止高脂肪、高展蛋白飲食。
3、飲食對(duì)血脂檢驗(yàn)影響重大,至少應(yīng)當(dāng)在抽血前的3天以內(nèi)注意保持正常飲食。
(二) 避免藥物影響
藥物對(duì)生化檢驗(yàn)和細(xì)菌培養(yǎng)的影響是十分復(fù)雜的。因此,如有可能,受檢者在化驗(yàn)前的1-2天應(yīng)停服一切藥物。如果因治療需要必須服藥,則在分析化驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)考慮藥物的影響。
(三)避免運(yùn)動(dòng)的影響
1、劇烈運(yùn)動(dòng)可以使許多血液成分發(fā)生改變,甚至持續(xù)24小時(shí)以上,因此劇烈運(yùn)動(dòng)之后不應(yīng)立即抽血快步行走之后,至少應(yīng)休息10-15分鐘后再抽血。
2、應(yīng)在平靜狀態(tài)抽血,避免情緒激動(dòng)。
檢查時(shí)要求:
1、為了保證體檢后能準(zhǔn)確的了解自己的體檢結(jié)果,請(qǐng)?jiān)隗w檢前認(rèn)真填寫體檢表和每張化驗(yàn)單,字跡要清楚,尤其是姓名。
2、采集血清后要靜坐休息15—20分鐘。