血液碳氧血紅蛋白概述
一氧化碳(CO)為無色氣體,有微弱的臭味。CO是一種常見的嚴重危害人體健康的窒息性化學毒物,主要表現(xiàn)在它與血液中的血紅蛋白(Hb)結合,形成碳氧血紅蛋白(COHb)后,使Hb失去輸氧能力。嚴重CO中毒時,可因組織缺氧而導致死亡。因此,血中COHb濃度的監(jiān)測在健康監(jiān)護方面具有重要意義。
血液碳氧血紅蛋白正常值
定性:陰性。
定量:不吸煙者0~0.023(0~2.3%),吸煙者0.021~0.042(2.4%~4.2%,<6.5%)。
血液碳氧血紅蛋白臨床意義
升高見于一氧化碳中毒(CoHb>50%致死)。
血液碳氧血紅蛋白檢查方法
1、碳氧血紅蛋血紅蛋白定性試驗:
①取試管2支,各加蒸餾水3~5ml,一管加患者血液3滴,另一管加正常人對照血3滴,混勻。此時。如患者血中有一氧化化碳,則血液呈櫻桃紅色。
②每管各加50g/L NaOH 1滴,輕輕混合,正常對照管呈綠褐色,如患者血液中有碳氧血紅蛋血紅蛋白,則溶血液仍呈櫻桃紅色,為陽性;如與正常對照色澤一致為陰性。
2、碳氧血紅蛋血紅蛋白雙波長定量測定:
①F值制定:制備Hb溶液(不含COHb)和飽和COHb溶液(COHb含量為100%)。取不吸煙并于近期無CO接觸史者的全血50μl,加入6.0ml試劑Ⅱ中,放置5min,使充分溶血。另取兩只25.0ml容量瓶,每瓶準確加入上述溶血液2.0ml,在通風櫥內(nèi),其中一瓶通入空氣5min;另一瓶通入煤氣(CO)1min,然后通入氮氣2min。每瓶加入Na2S2O4 250mg,加試劑Ⅰ至刻度,加塞顛倒3~5次,使其溶解。10min后,用420nm和432nm兩波長比色,以試劑Ⅱ調(diào)零,記錄AHb420、AHb432、ACOHb420、ACOHb432。根據(jù)比爾定律:A=a·b·c,因為Hb和COHb均來自同一份樣,血紅蛋白含鐵摩爾濃度(c)相同,比色條件相同(b),故:
應用上法,測得F值分別為F1=1.3041;F2=0.5742;F3=1.8627。
②樣品測定:取小試管一支,加試劑Ⅱ1.2ml,加入常規(guī)采取的指血10μl,混勻5min使之溶血,另取帶塞試管一支,取上述溶血液0.2ml與2.3ml試劑Ⅰ相混合,加Na2S2O4 25mg,加塞顛倒使其溶解,10min后用試劑Ⅱ調(diào)零,在窄帶寬型分光光度計上用420nm和432nm兩個波長比色,記錄A420和A432。
血液碳氧血紅蛋白注意事項
1、碳氧血紅蛋白定性試驗:
①觀察結果須及時,否則櫻桃紅色逐漸褪去,不易分辨。
②本試驗敏感性較差,血液中一氧化碳含量到一定程度時才顯陽性。如患者事先已采取通氣措施,血中一氧化碳含量下降,試驗可陰性。但臨床癥狀、體征仍可能存在。
2、碳氧血紅蛋白雙波長定量測定:
①COHb定量測定中,沒有標準品,確定公式中F1,F(xiàn)2,F(xiàn)3的值是COHb準確定量的前提,雖然有文獻提供F值,但由于各實驗室的設備條件不完全一致,如分光光度計的單色光波長寬度、波長誤差等,因此不宜直接套用文獻F值,應依據(jù)所使用的分光光度計確定F值。F值確定后,只要儀器條件不改變,可以一直使用,故不會增加常規(guī)樣品測定的工作量。
②在制備100%飽和度COHb(用于制定F值)時,如無民用煤氣,也可用化學方法制備CO:取甲酸100ml和硫酸150ml混合,產(chǎn)生的氣體依次通入NaOH(5mol/L)、水和CaCl2(0.5mol/L)中進行純化后收入乳膠手套內(nèi)備用。
③本法的方法學評價結果:樣品顯色后,30min內(nèi)呈色穩(wěn)定;重復試驗結果(n=20):=10.41%,s=0.21,CV3.7%;回收率為92.7%~106.3%。