α-羥丁酸脫氫酶概述
α-羥丁酸脫氫酶(α-HBDH)與LDH關(guān)系十分密切,實(shí)際上它是LDH同工酶Ⅰ型,因其對(duì)α-酮丁酸親合力高,所以當(dāng)以α-酮丁酸作為底物時(shí),所測(cè)LDH的活性特稱(chēng)為α-羥丁酸脫氫酶活性。α-HBDH測(cè)定方法主要有比色法和連續(xù)監(jiān)測(cè)法。
α-羥丁酸脫氫酶正常值
1、比色法61~155U/L(37℃)。
2、連續(xù)監(jiān)測(cè)法72~182U/L。
α-羥丁酸脫氫酶臨床意義
α-HBDH的活性與LDH的活性變化一致,但更能反映LDH1的活性變化,其特異性比總LDH活性高。與LDH、AST、CK、CK-MB構(gòu)成心肌酶譜,對(duì)診斷心肌梗死更有意義。
1、心肌梗死時(shí)α-HBDH活性明顯升高,且維持時(shí)間較LDH長(zhǎng),LDH/α-HBDH比值(0.8~1.2)低于正常對(duì)照(1.2~1.6)。
2、鑒別肝病和心臟病。肝病和心臟病時(shí)LDH均可升高,但肝病時(shí)α-HBDH活性變化不大,LDH/α-HBDH比值可升高至1.6~2.5,而心臟疾病時(shí)α-HBDH則明顯升高。
3、營(yíng)養(yǎng)不良、葉酸和維生素B12缺乏時(shí),α-HBDH活性亦可升高。
α-羥丁酸脫氫酶檢查方法
1、比色法:按步驟進(jìn)行操作。
混勻,在10~30min內(nèi),以490nm波長(zhǎng),光徑1cm,蒸餾水調(diào)零比色,以AU-AC之差值,查標(biāo)準(zhǔn)曲線得酶活力單位。
2、連續(xù)監(jiān)測(cè)法:
(1)取血清0.05ml,加入NADH溶液2ml,37℃水浴10~15min,使NADH非特異性氧化完成。
(2)加入預(yù)溫至37℃的α-酮丁酸0.1ml充分混合,立即倒入37℃恒溫比色杯內(nèi)監(jiān)測(cè)。340nm波長(zhǎng),1cm光徑,空氣調(diào)零。
(3)如△A/min>0.08,用磷酸鹽緩沖液稀釋血清5或10倍后重測(cè)。
α-羥丁酸脫氫酶注意事項(xiàng)
1、比色法:
(1)Rosalki及Wilkinson建立的α-HBDH測(cè)定方法是30℃的連續(xù)監(jiān)測(cè)法,以國(guó)際單位(U/L)計(jì)算。上述方法是37℃比色法,為使各方法間結(jié)果有更好的可比性,可轉(zhuǎn)換成30℃連續(xù)監(jiān)測(cè)法的相應(yīng)單位。37℃轉(zhuǎn)換成30℃溫度系數(shù)為0.87。
(2)因紅細(xì)胞內(nèi)該酶活性高,應(yīng)在2h內(nèi)及時(shí)分離血清,標(biāo)本不能溶血。4℃酶活性穩(wěn)定不少于7天。
(3)可用EDTA(1mg/ml)、肝素(0.2mg/ml)抗凝血漿,草酸鹽、枸櫞酸鈉、氟化物抗凝劑可抑制該酶活性。
2、連續(xù)監(jiān)測(cè)法:
(1)此法是1980年由英國(guó)臨床化學(xué)協(xié)會(huì)(ACB)推薦,其最適底物濃度為15mmol/L(25℃),反應(yīng)混合物的最終濃度:磷酸鹽65.4mmol/L、NADH 0.2mmol/L、α-酮丁酸3.3mmol/L,樣品容積組分比0.023。改為37℃測(cè)定結(jié)果與LDH相關(guān)性較好。
(2)α-酮丁酸鈉較穩(wěn)定,α-酮丁酸長(zhǎng)期存放,其縮合物可抑制酶促反應(yīng)。
(3)國(guó)內(nèi)商品試劑盒的方法,一般是在操作前將α-酮丁酸與NADH溶液混合,置反應(yīng)溫度條件下數(shù)分鐘后,作為單一試劑取出一定量加入樣品中,延遲時(shí)間30s后,監(jiān)測(cè)3min。