病毒性肝炎的診斷是在肝炎臨床表現(xiàn)的基礎上結合流行病學史，并檢測到病毒特異性標志物。
甲型肝炎確診的標記物是抗-HAVIgM陽性，通常在發(fā)病后1周左右即可在血清中測出。乙肝肝炎確診的標記物是乙肝五項(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)中至少有2-3項陽性(大三陽：HBsAg、HBeAg、抗-HBc或小三陽：HBsAg、抗-HBe、抗-HBc)，乙肝HBV DNA的載量可反應病毒復制的活躍程度，肝功能異常程度反應肝臟炎癥的活動程度;丙型肝炎確診的標記物是抗-HCV陽性;戊型肝炎確診的標記物是抗-HEVIgM抗-HEV 陽性;丁型肝炎確診的標記物是抗-HDV陽性或HDV 抗原陽性。
病毒性肝炎需與溶血性黃疸、肝外梗阻性黃疸、非嗜肝病毒(如巨細胞病毒、EB病毒)所致的肝炎、藥物性肝損害、酒精性肝病、自身免疫性肝炎等疾病相鑒別。