傷寒與副傷寒
傷寒與副傷寒 的檢查:
血清免疫球蛋白M(IgM) 傷寒膠乳凝集試驗(yàn) 嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(E) 單核細(xì)胞計(jì)數(shù)(M) 血液及骨髓細(xì)菌培養(yǎng) 傷寒、副傷寒血清凝集試驗(yàn)(肥達(dá)氏試驗(yàn),肥達(dá)反應(yīng),Widal)
(一)常規(guī)檢查
血白細(xì)胞大多為3×109/L~4×109/L,伴中性粒細(xì)胞減少和嗜酸粒細(xì)胞消失,后者隨病情的好轉(zhuǎn)逐漸回升。極期嗜酸粒細(xì)胞>2%,絕對(duì)計(jì)數(shù)超過4×108/L者可基本除外傷寒。高熱時(shí)可有輕度蛋白尿。糞便隱血試驗(yàn)陽性。
(二)細(xì)菌學(xué)檢查
①血培養(yǎng)是確診的論據(jù),病程早期即可陽性,第7~10病日陽性率可達(dá)90%,第三周降為30%~40%,第四周時(shí)常陰性;②骨髓培養(yǎng)陽性率較血培養(yǎng)高,尤適合于已用抗菌素藥物治療,血培養(yǎng)陰性者;③糞便培養(yǎng),從潛伏期起便可獲陽性,第3~4周可高達(dá)80%,病后6周陽性率迅速下降,3%患者排菌可超過一年;④尿培養(yǎng):病程后期陽性率可達(dá)25%,但應(yīng)避免糞便污染;⑤玫瑰疹的刮取物或活檢切片也可獲陽性培養(yǎng)。
(三)免疫學(xué)檢查
1.肥達(dá)氏試驗(yàn)傷寒血清凝集試驗(yàn) 即肥達(dá)反應(yīng)陽性者對(duì)傷寒,副傷寒有輔助診斷價(jià)值。檢查中所用的抗原有傷寒桿菌菌體(O)抗原,鞭毛(H)抗原,副傷寒甲,乙,丙鞭毛抗原共5種,目的在于用凝集法測(cè)定病人血清中各種抗體的凝集效價(jià)。病程第1周陽性反應(yīng)不多,一般從第2周開始陽性率逐漸增高,至第4周可達(dá)90%,病愈后陽性反應(yīng)可持續(xù)數(shù)月之久。有少數(shù)病人抗體很遲才升高,甚至整個(gè)病程抗體效價(jià)很低(14.4%)或陰性(7.8%~10%),故不能據(jù)此而排除本病。
Widal試驗(yàn)已沿用近100年,60年代曾有人對(duì)其特異性提出異議,認(rèn)為其結(jié)果存在著混亂模糊的情況,非傷寒發(fā)熱性疾病Widal"s試驗(yàn)也呈陽性結(jié)果,如各種急性感染,腫瘤,結(jié)締組織病性疾病,慢性潰瘍性結(jié)腸炎,均可出現(xiàn)陽性結(jié)果。Perlnan等認(rèn)為無菌的結(jié)腸細(xì)胞和腸桿菌可能有共同的抗原,結(jié)腸粘膜損害所產(chǎn)生的抗結(jié)腸抗體與沙門菌菌體抗原起交叉反應(yīng),因此對(duì)肥達(dá)氏反應(yīng)結(jié)果的判定宜審慎,必須密切結(jié)合臨床資料,還應(yīng)強(qiáng)調(diào)恢復(fù)期血清抗體效價(jià)的對(duì)比,有人提出應(yīng)用流行菌株抗原與國際菌株相比,陽性率可提高,建議用當(dāng)?shù)亓餍芯耆〈鷩H標(biāo)準(zhǔn)菌株,以提高流行區(qū)域傷寒診斷的陽性率。
2.其他免疫學(xué)檢查
(1)被動(dòng)血凝試驗(yàn)(PHA):用傷寒桿菌菌體抗原致敏紅細(xì)胞,使之與被檢血清反應(yīng),根據(jù)紅細(xì)胞凝集狀況判斷有無傷寒特異性抗體存在,國內(nèi)外報(bào)道陽性率90%~98.35%,假陽性率5%左右。鮑行豪等曾報(bào)道LSP-PHA對(duì)傷寒血培養(yǎng)患者的檢出率為89.66%,早期病人90.02%,臨床確診者為82.5%,且主要檢測(cè)的是特異IgM抗體,故可用于早期診斷。
(2)對(duì)流免疫電泳(CIE):本方法可用于血清中可溶性傷寒抗原或抗體的檢測(cè),操作簡(jiǎn)便,便于基層推廣,特異性較高;但敏感性較低,不同作者報(bào)道為24%~92%,主要受采集血清時(shí)間的影響,發(fā)病初期最易測(cè)出,故可用于傷寒的早期診斷。
(3)協(xié)同凝集試驗(yàn)(COA):利用金葡菌的葡萄球菌A蛋白(SPA)可與抗體IgG的Fc段結(jié)合的原理,先用傷寒抗體致敏帶有SPA的金葡菌,然后與抗原發(fā)生反應(yīng),本試驗(yàn)的陽性率在81%~92.5%,特異性為94%~98%,一般來說,其敏感性高于CIE,而特異性較CIE差。
(4)免疫熒光試驗(yàn)(IFT):Doshi等用傷寒桿菌菌體Vi懸液作抗原進(jìn)行間接免疫熒光抗體檢測(cè),140例血培養(yǎng)陽性的傷寒患者134例(95.7%)陽性;394例對(duì)照者僅4例(1%)假陽性,目前有關(guān)本法的報(bào)道尚少,傷寒疫苗預(yù)防接種和其它沙門氏菌感染是否會(huì)影響本試驗(yàn)特異性,尚需進(jìn)一步研究。
(5)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA):ELISA的基本原理是用酶促反應(yīng)的放大作用來顯示初級(jí)免疫學(xué)反應(yīng),既可檢測(cè)抗原,又可檢測(cè)抗體,用ELISA法檢測(cè)傷寒患者Vi抗原,靈敏性達(dá)1ng/ml,高于CoA法9100ng/ml,并可檢測(cè)到1∶1024稀釋后尿液中的Vi抗原。國內(nèi)、外用ELISA檢測(cè)過臨床標(biāo)本中的Vi抗原,V9抗原,LPS,H抗原等,敏感性在62.5%~93.1%,因檢測(cè)抗原的不同而異,多數(shù)在80%以上。杭州鮑行豪等應(yīng)用ELISA同時(shí)檢測(cè)IgM和IgG抗體,LPS-IgM-ELISA的敏感性為91.38%,特異性為99.02%,LPS-IgG-ELISA分別為93.1%和98.02%,在傷寒的血清免疫學(xué)診斷方法中,ELISA方法簡(jiǎn)便,快速,敏感,特異性高,是公認(rèn)較好的一種診斷方法。
(四)分子生物學(xué)診斷方法
1.DNA探針(DNAProbe)DNA探針是用DNA制備的診斷試劑,用于檢測(cè)或鑒定特定的細(xì)菌,方法是用一段已標(biāo)記的特定的DNA片段(探針)與標(biāo)本中已變性的細(xì)菌DNA雜交,通過測(cè)定是否發(fā)生雜交反應(yīng)來達(dá)到檢測(cè)目的,由于此探針是以細(xì)菌專有的特異性基因片斷制備,故特異性很高。用DNA探針對(duì)培養(yǎng)所得的傷寒桿菌進(jìn)行檢測(cè),敏感性需標(biāo)本中達(dá)1000個(gè)細(xì)菌才能檢出。DNAProbe的特異性高而敏感性低,一般用于菌種鑒定及分離。
2.聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)PCR方法是80年代中后期發(fā)展起來的一種分子生物學(xué)方法,它能在數(shù)小時(shí)內(nèi)在體外將目標(biāo)基因或DNA片段擴(kuò)增到數(shù)百萬倍,檢出率較DNA探針高100~10000倍,國外JaeHS等用PCR方法擴(kuò)增傷寒的鞭毛抗原編碼基因,敏感度能檢出10個(gè)傷寒菌,特異性為100%,PCR方法因其高度敏感,易出現(xiàn)產(chǎn)物污染,所以控制PCR方法的假陽性及假陰性,是提高準(zhǔn)確度的關(guān)鍵。
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