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旅行者腹瀉別名:旅行性腹瀉

旅行者腹瀉 的檢查:

痢疾桿菌檢測(cè) 血清鈉(Na+,Na) 血清鉀(K+,K) 血常規(guī) 蛋白質(zhì)、氨基酸分解產(chǎn)物試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)室檢查
1.糞便白細(xì)胞分類 玻片下滴亞甲藍(lán)2滴,將糞便標(biāo)本在其中涂勻,加蓋玻片2~3min后鏡檢,滲出性病變主要為多核白細(xì)胞,傷寒、過敏性反應(yīng)多為單核細(xì)胞。
2.糞便培養(yǎng)病原菌 連續(xù)3次的常規(guī)糞便培養(yǎng),必要時(shí)還可重復(fù)。過去常規(guī)進(jìn)行志賀菌和沙門菌的檢出,已大大不夠,除采用雙硫與血液瓊脂培養(yǎng)基外,應(yīng)根據(jù)可疑致病菌選用相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件,厭氧培養(yǎng)(如彎曲菌、難辨梭桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌等)、含有抗生素的選擇性培養(yǎng)基(如彎曲菌)、堿性或含鹽培養(yǎng)基(如霍亂弧菌及其他弧菌),以及國內(nèi)提出的冷增菌及堿化處理后雙硫平板檢測(cè)耶爾森菌等。選擇糞便中的膿液及黏液部分,及時(shí)接種;最好是病人服用抗菌藥物前采樣。采用多種特殊培養(yǎng)基,在不同含氧情況下培養(yǎng);挑取多個(gè)菌落作各種鑒定,是提高陽性培養(yǎng)結(jié)果的關(guān)鍵。輪狀病毒雖已能成功分離,但手續(xù)繁瑣,要求條件高,檢出時(shí)間長,非一般實(shí)驗(yàn)室所能完成。
3.循環(huán)抗體的測(cè)定 大多數(shù)抗體檢測(cè)系統(tǒng)(包括血凝抑制法、ELISA法等),對(duì)病毒和細(xì)菌均具有特異性。已用血清抗體滴度的變化來測(cè)定諾瓦克類病毒的流行、輪狀病毒和ETEC的鑒定。但免疫熒光對(duì)藍(lán)氏賈第鞭毛蟲抗體則易出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
4.腸毒素的檢測(cè)
(1)生物學(xué)鑒定:用乳鼠灌胃法鑒定ST毒素(因其分子量過小,其他免疫診斷有困難)、親水氣單胞菌腸毒素等。也可用家兔腸襻分泌試驗(yàn)(secretion in rabbit intestinal loops test)檢測(cè)ST和LT腸毒素。
(2)組織培養(yǎng)法:已能用Y1腎上腺細(xì)胞、中國田鼠卵細(xì)胞(CHO)等組織培養(yǎng)細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞毒素和LT腸毒素的分類。
(3)Biken試驗(yàn):由Elek和Ouchtertory試驗(yàn)的原理組成。在瓊脂板上產(chǎn)LT克隆,能與抗霍亂抗血清形成沉淀線來區(qū)別腸毒素。
5.病毒RNA凝膠電泳 可直接從糞便標(biāo)本中提取病毒RNA,用聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染色法,按特征性RNA電泳圖譜,進(jìn)行輪狀病毒的分類與快速診斷。
6.DNA分子雜交試驗(yàn) 以放射自顯影放射性核素標(biāo)記法,試用于輪狀病毒的檢測(cè)、EIEC腸毒素的同源DNA編碼基因的檢測(cè)等。
7.DNA同源學(xué)檢查 用遺傳工程技術(shù)鑒定致病弧菌、大腸埃希桿菌的產(chǎn)腸毒素質(zhì)粒。
影像學(xué)檢查
1.電鏡與免疫電鏡檢查 可直接觀察病毒形態(tài)及特異性抗原顆粒的檢出,用ELISA法檢測(cè)輪狀病毒雖已大大超過電鏡檢查,但電鏡對(duì)其他致腹瀉性病毒如腺病毒、冠狀病毒等,仍屬需要。對(duì)隱孢子蟲的結(jié)構(gòu)和生活循環(huán)可進(jìn)行觀察,電鏡掃描對(duì)腸道微生物,能獲得特殊形象,但手續(xù)過繁。
2.免疫學(xué)檢查 包括ELISA、固相放射免疫法及反向被動(dòng)血凝法。用于檢測(cè)糞便中細(xì)菌、病毒抗原、血清中特異性抗體,特別以單克隆抗體為診斷試劑應(yīng)用以來,大大提高了靈敏性與準(zhǔn)確性,已用于大腸埃希桿菌LT腸毒素、輪狀病毒、嬰幼兒腹瀉病毒的鑒定和阿米巴、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲抗原、抗體等的檢測(cè)。
3.氣相色譜儀 已較普及地用于對(duì)厭氧菌的鑒定,如用于難辨梭狀芽孢桿菌的快速診斷等。
4.聚合酶鏈反應(yīng)(PCR) 特異擴(kuò)增病原體目的基因,簡便、快速、敏感,不需培養(yǎng)可直接用于糞便檢測(cè),是目前感染性腹瀉,尤其是病毒性腹瀉病原診斷的一種理想技術(shù)。
5.芯片技術(shù) DNA芯片技術(shù)或基因芯片是指同時(shí)將極其大量的探針分子固定到固相(玻璃片或硅片)支持物上,借助核酸分子雜交配對(duì)的特性將DNA樣品的序列信息作高通量、高效率的解讀和分析的技術(shù)。
(1)DNA芯片技術(shù)的特點(diǎn)有:
①微量化(上樣量最小達(dá)0.25~1nl)。
②規(guī)模大、信息儲(chǔ)量大(已有短陣排列高于100萬種的寡核苷酸探針)。
③并行化(如30萬種微矩陣排列的探針同時(shí)與1萬種待測(cè)DNA雜交,完成雜交)。
④高效率和高度自動(dòng)化(由于信息容量大、矩陣排列、同時(shí)檢測(cè)),操作、運(yùn)行完全自動(dòng)化,故效率極高。
(2)DNA芯片技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛,前景廣闊、進(jìn)展迅速。主要應(yīng)用于:
①DNA序列分析。
②基因突變、基因多態(tài)性分析與腫瘤的診斷。
③新藥開發(fā)與組分篩選。
④基因差異表達(dá)與基因表達(dá)譜的分析。
⑤病原微生物和傳染病的實(shí)驗(yàn)診斷。
6.T7核糖核酸聚合酶放大的免疫檢測(cè)系統(tǒng)(IDAT) IDAT(immuno-detection amplified by T RNA polymerase),即T7核糖核酸聚合酶放大的免疫檢測(cè)技術(shù),該技術(shù)通過固定一種目標(biāo)蛋白質(zhì)(用信號(hào)顯示其存在)與抗體結(jié)合后激發(fā)助催化劑,后者可再激發(fā)T7核糖核酸聚合酶活化、轉(zhuǎn)錄出特定核糖核酸分子(信號(hào)分子)作為指示系統(tǒng)。IDAT法的靈敏度極高(可檢測(cè)單種蛋白質(zhì)分子),操作簡便(可自動(dòng)化)。進(jìn)一步改良使用通用的探測(cè)分子,則可能探測(cè)無限多種蛋白質(zhì)及脂質(zhì)、糖分和其他細(xì)胞分子。IDAT技術(shù)與蛋白質(zhì)芯片技術(shù)結(jié)合將把生物芯片技術(shù)推向新水平。在癌癥早期發(fā)現(xiàn)、篩選新藥與分子樣本等重要領(lǐng)域發(fā)揮潛在用途。
7.選擇性捕獲轉(zhuǎn)錄序列的分析系統(tǒng)(SCOTS) SCOTS技術(shù)由Graham和Clark-Curtiss等1999年建立,他們共同研究結(jié)核桿菌在人巨噬細(xì)胞內(nèi)的反應(yīng)時(shí),發(fā)現(xiàn)與DNA修復(fù)、營養(yǎng)代謝、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)及毒力產(chǎn)生等有關(guān)的許多基因發(fā)生了轉(zhuǎn)錄。Morrow等聯(lián)合應(yīng)用SCOTS和基因組差異雜交方法,檢測(cè)傷寒桿菌在對(duì)巨噬細(xì)胞基因組內(nèi)的某些操縱子和轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子作了研究。顯然,利用SCOTS技術(shù)或與當(dāng)代的新型實(shí)驗(yàn)手段相合,可從基因組水平認(rèn)識(shí)基因表達(dá),揭示細(xì)菌等病原體進(jìn)入機(jī)體、相互作用及感染機(jī)制,將會(huì)極大地豐富研究內(nèi)容,提高實(shí)驗(yàn)診斷水平。

 

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