間接血凝試驗概述
間接血凝試驗(IHA)是將抗原(或抗體)包被于紅細胞表面,成為致敏的載體,然后與相應(yīng)的抗體(或抗原)結(jié)合,從而使紅細胞拉聚在一起,出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)。
間接血凝試驗正常值
間接血凝法是用吸附有DNA的鞣化紅細胞與倍比稀釋的被檢血清作用,如血清中含有抗DNA抗體,則紅細胞發(fā)生凝集。
間接血凝試驗臨床意義
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間接血凝試驗檢查方法
1.載體 紅細胞是大小均一的載體顆粒,最常用的為綿羊、家兔、雞的紅細胞及O凝型人紅細胞。新鮮紅細胞能吸附多糖類抗原,但吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力較差。致敏的新鮮紅細胞保存時間短,且易變脆、溶血和污染,只能使用2~3d。為此一般在致敏前先將紅細胞醛化,可長期保存而不溶血。常用的醛類有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。紅細胞經(jīng)醛化后體積略有增大,兩面突起呈圓盤狀。醛化紅細胞具有較強的吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力,血凝反應(yīng)的效果基本上與新鮮紅細胞相似。如用兩種不同醛類處理效果更佳。也可先用戊二醛,再用鞣酸處理。醛化紅細胞能耐60C的加熱,并可反復(fù)凍融不破碎,在4℃環(huán)境中可保存3—6個月,在一20℃的環(huán)境中可保存1年以上。
2.致敏 致敏用的抗原或抗體要求純度高,并保持良好的免疫活性。用蛋白質(zhì)致敏紅在低pH,低離子濃度下,用醛化紅細胞直接吸附即可。間接法則需用耦聯(lián)劑將蛋白質(zhì)結(jié)合到紅細胞上。常用耦聯(lián)劑為雙耦氮聯(lián)苯胺(bis-diazotized benzidine,BDB)和氯化鉻。前者通過共價鍵,后者通過金屬陽離子靜電作用使蛋白質(zhì)與紅細胞表面結(jié)合而達到致敏的目
3.血凝試驗 可在微量滴定板或試管中進行,將標(biāo)本倍比稀釋,一般為1:64,同時設(shè)不含標(biāo)本的稀釋液對照孔。在含稀釋標(biāo)本1滴的板孔(或試管)中,加入0.5%致敏紅細胞懸液1滴,充分混勻,置室溫1~2h,即可觀察結(jié)果。凡紅細胞沉積于孔底,集中呈1圓點的為不凝集(一)。如紅細胞凝集,則分布于孔底周圍。根據(jù)紅細胞凝集的程度判斷陽性反應(yīng)的強弱,以抖凝集的孔為滴度終點。
間接血凝試驗注意事項
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