細(xì)菌的鑒定概述
細(xì)菌的鑒定是對(duì)細(xì)菌進(jìn)行各方面的檢查。例如細(xì)菌對(duì)于碳水化合物的代謝試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、淀粉的水解等各種試驗(yàn)。
細(xì)菌的鑒定正常值
胃腸道的正常菌群可分為需 氧菌、兼性厭氧菌和厭氧菌。最居優(yōu)勢(shì)的是厭氧菌,占菌群總數(shù)的99%,其中僅類桿菌和雙歧桿菌就占90%,而乳桿菌和雙歧桿菌可與我們終生相隨。這些正常菌群的種類以及比例均正常。
細(xì)菌的鑒定臨床意義
有些細(xì)菌可以分解色氨酸生成吲哚可以與二甲基氨基苯甲醛反應(yīng)生成紅色的玫瑰吲哚,因此可根據(jù)細(xì)菌能否分解色氨酸產(chǎn)生吲哚來鑒定菌種。
異常結(jié)果:
1. 腸道的內(nèi)環(huán)境不處于動(dòng)態(tài)平衡,正常細(xì)菌的比例失調(diào)。 痛、胃酸、胃脹、腹瀉、腹痛、下墜、膿血便等癥狀,嚴(yán)重時(shí)還會(huì)引起消化道出血、穿孔、誘發(fā)癌變,如胃癌、結(jié)腸癌等。
2. 埃希氏菌引起腸道外感染,特別是泌尿道感染。枸櫞酸桿菌屬引起原發(fā)性枸櫞酸桿菌肺炎或繼發(fā)性枸櫞酸桿菌肺炎。病理改變主要表現(xiàn)為支氣管肺炎,可有肺泡壁破壞形成小膿腫及局灶性出血??死撞鷮僖鸬暮粑栏腥?、敗血癥、化膿性腦膜炎、尿路感染等臨床癥狀。還有沙門菌屬、變形桿菌屬等引起的各種異常癥狀。
3. 某些細(xì)菌水解淀粉并利用其水解產(chǎn)物,有產(chǎn)酸產(chǎn)氣導(dǎo)致人體的不適。
需要檢查的人群:有消化道出血、穿孔、誘發(fā)癌變等各種細(xì)菌感染癥狀者。
細(xì)菌的鑒定檢查方法
一. 吲哚試驗(yàn)
方法:以接種環(huán)接種待試細(xì)菌的新鮮斜面培養(yǎng)物于鄧亨氏蛋白胨溶液中, 37℃培養(yǎng)24~48小時(shí)后(可延長(zhǎng)4~5天)。于培養(yǎng)液中加入戊醇或二甲苯2~3ml,搖勻,靜置片刻后,沿試管壁加入試劑2毫升。在戊醇或二甲苯下面的液體變紅色者為陽(yáng)性反應(yīng)。
也可將一指頭大的脫脂棉,滴上兩滴歐立希氏試劑,再在同處加滴兩滴高硫酸鉀(K2S2O4)飽和水溶液,置于含培養(yǎng)液的被檢試管中,離液面約半寸,置燒杯內(nèi)水浴煮沸為止,脫脂棉上出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。此法略繁,但省試劑且準(zhǔn)確,因?yàn)閷⒃噭┘拥揭后w中,吲哚和糞臭素均呈陽(yáng)性,而用此法,只是吲哚(它能揮發(fā))呈陽(yáng)性反應(yīng)。
亦可以濾紙片浸濕1%的二甲基苯丙烯甲醛的10%濃HCl溶液,然后以接種環(huán)刮取一環(huán)瓊脂的純培養(yǎng)物涂布于該濾紙上。
細(xì)菌涂印周圍呈藍(lán)色者為陽(yáng)性,細(xì)菌涂印周圍無色澤變化或淡黃色者為陰性。
二. 淀粉的水解
淀粉在酸的催化作用下,能發(fā)生水解;淀粉的水解過程:先生成分子量較小的糊精(淀粉不完全水解的產(chǎn)物),糊精繼續(xù)水解生成麥芽糖,最終水解產(chǎn)物是葡萄糖。
對(duì)劑:碘化鉀 2g 蒸餾水 300ml
培養(yǎng)基:將細(xì)菌接種在平板上,置37度溫箱中培養(yǎng)24h,加革蘭氏碘液于菌落上,觀察顏色變化,呈藍(lán)色者為陰性,無藍(lán)色為陽(yáng)性。
三. β-半乳糖苷酶試驗(yàn)
試劑:0.75M ONPG溶液:取80mg溶于15ml蒸餾水中,在加入緩沖液(6.9g NaH2P04溶于45ml蒸餾水中,用30% NaOH調(diào)整pH為7.0,再加水至50ml)5ml,置4℃冰箱中保存。
方法:取純菌落用無菌生理鹽水制成濃的菌懸液,加入0.25ml ONPG液,置35℃水浴20min至3h,觀察結(jié)果。
結(jié)果判定:通常在20~30min內(nèi)顯色。出現(xiàn)黃色為陽(yáng)性反應(yīng)。
細(xì)菌的鑒定注意事項(xiàng)
檢查前禁忌:要保持良好的作息習(xí)慣,注意正常的飲食習(xí)慣。
檢查時(shí)要求:積極配合醫(yī)生。