纖維蛋白肽A概述
纖維蛋白肽A(fibrinopepide-A,F(xiàn)PA)是在凝血酶作用下,纖維蛋白原α;(A)鏈的精-16和甘-17之間的肽鏈裂解,釋放出由1~16個(gè)氨基酸組成的纖維蛋白肽A。是反映體內(nèi)凝血活性及纖維蛋白最終形成血栓的可靠指標(biāo)。
纖維蛋白肽A正常值
1.2±0.8μg/L。
纖維蛋白肽A臨床意義
血漿FPA含量增高反映凝血系統(tǒng)激活和凝血酶的生成。因此見于高凝狀態(tài)和血栓性疾病,原發(fā)性和繼發(fā)性纖溶的鑒別,抗凝治療過程中的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。
纖維蛋白肽A檢查方法
抽血化驗(yàn)。
(1)血漿標(biāo)本的采集:用塑料注射器順利取靜脈血4.5ml(開始的2ml棄去),加入盛有0.5ml抗凝劑(肝素鈉500u和aprotinin 5000u)的試管中,立即混勻。3000r/min離心20min,分離血漿,吸上層血漿至另一試管,立即作下一步處理或置-20℃保存。
(2)血漿標(biāo)本的皂土吸附處理:目的是徹底除去纖維蛋白原。40mg皂土加入45ml的聚丙烯塑料離心管中,加入0.5ml吸附緩沖液,充分混勻,加入1ml血漿,在回旋混合器上震蕩混勻,再緩慢震搖10min。5000r/min離心15min,吸取上清液至另一試管,再如上法以皂土吸附處理1次。然后吸取上清液1ml加到一預(yù)先盛有20g/LTween20溶液50μl的試管中,混勻。最終標(biāo)本已稀釋20倍。
(3)FPA包被:取1μg/ml的FPA溶于包被緩沖液中,加入聚苯乙烯反應(yīng)板,200μl/孔,加蓋,37℃過夜。次日棄孔內(nèi)液。以洗滌液洗板5次,每次3min,甩干,備用。
(4)FPA標(biāo)準(zhǔn)品:以標(biāo)本稀釋緩沖液配成;25,12.5,6.25,3.12,1.56,0.78ng/ml等6個(gè)不同濃度。分別吸取0.9ml于一系列小試管中,再在各管中加入0.1ml的工作濃度的兔抗人FPA。經(jīng)皂土吸附處理的待測(cè)血漿標(biāo)本作原倍、1∶2、1∶4倍3個(gè)濃度如上操作。上述各管置37℃反應(yīng)3h。
(5)從溫育后的上述各管中分別吸取200μl加入已包被的FPA的反應(yīng)板各孔中,置板于37℃保溫2h,洗板5次,甩干。
(6)各孔加HRP-羊抗兔IgG(以標(biāo)本稀釋液稀釋至工作濃度)200μl/孔,置板于37℃溫育2h,洗板5次,甩干。
(7)各孔加新鮮配制的底物液200μl,37℃避光精確反應(yīng)3min,各孔立即滴加3mol/L H2SO4 50μl以終止反應(yīng)。在酶標(biāo)上測(cè)定各孔的A值(492nm)。
纖維蛋白肽A注意事項(xiàng)
(1)采血要順利不應(yīng)>45s,且開頭2ml棄去,注射器要硅化或用塑料注射器。
(2)采血后立即注入盛有抗凝劑的試管中,并在冰水中迅速混合,若需保存則以經(jīng)皂土吸附處理后-20℃較妥。