載脂蛋白CⅠ概述
載脂蛋白C是極低密度脂蛋白膽固醇的主要載脂蛋白,也存在于高密度脂蛋白-膽固醇和低密度脂蛋白-膽固醇中,有3種不同的載脂蛋白C,即ApoCⅠ、ApoCⅡ、ApoCⅢ,它是CM、VLDL他和HDL的少量結(jié)構(gòu)蛋白。
載脂蛋白CⅠ正常值
酶免疫測(cè)定法:37~99mg/L。
載脂蛋白CⅠ臨床意義
活化脂蛋白酯酶和卵磷脂膽固醇酯酰轉(zhuǎn)移酶的作用,測(cè)其含量對(duì)闡明脂蛋白C的功能、脂蛋白代謝及高脂血癥、心血管疾病的原因有重要意義。
載脂蛋白CⅠ檢查方法
載脂蛋白CⅠ注意事項(xiàng)
(1)免疫透射比濁法:
①關(guān)于抗血清:比濁測(cè)定與其他方法相比對(duì)抗血清的要求更高。比濁法以用多克隆抗體為宜??寡逯斜仨毑缓s抗體。必須十分重視從人血清中提取的apoA-Ⅰ達(dá)到免疫純、色譜純與電泳純,這不是一般實(shí)驗(yàn)室都能做到的??寡逍r(jià)(滴度)不可低于16。目前國(guó)內(nèi)某些商品試劑中,apoA-Ⅰ抗血清效價(jià)極低,選購(gòu)試劑盒時(shí)必須注意。如果沒(méi)有在選購(gòu)前鑒定抗血清質(zhì)量的經(jīng)驗(yàn),應(yīng)請(qǐng)有條件的單位鑒定之。
②上法中標(biāo)本(血清)稀釋200倍是為了便于手工操作(加樣100μl),如有精密加樣器,可作20倍稀釋(用10μl)。為了適合不同實(shí)驗(yàn)室的條件(如不同類型的自動(dòng)化儀器),作適當(dāng)修改時(shí)應(yīng)注意抗原抗體的比例,必須十分注意反應(yīng)體系中不可有抗原過(guò)量,線性上限不可低于2.5g/L。換言之,抗血清用量必須充裕,否則標(biāo)本中apoA-Ⅰ高水平時(shí)測(cè)出結(jié)果偏低。目前國(guó)內(nèi)某些商品試劑盒不但抗血清效價(jià)過(guò)低,操作中所定標(biāo)本用量又過(guò)大(如3~5μl),抗體明顯不足,測(cè)出結(jié)果必然不準(zhǔn)確。
③為了達(dá)到準(zhǔn)確測(cè)定的目的,apoA-Ⅰ與B比濁測(cè)定(終點(diǎn)法)中必須作校準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。一定范圍(低標(biāo)本用量)濃度(X)與濁度(Y)基本上成直線關(guān)系,直線回歸計(jì)算出在Y軸上有一定截距(A值<0.1),所以用單點(diǎn)校準(zhǔn)計(jì)算結(jié)果偏差較大,使測(cè)出結(jié)果不能準(zhǔn)確反映濃度的高低(高的偏低,低的偏高)。千萬(wàn)不要因?yàn)閱吸c(diǎn)法簡(jiǎn)便而忽略了測(cè)定的準(zhǔn)確性。無(wú)論用何種自動(dòng)化儀器,必須先試作校準(zhǔn)曲線。如果在所用儀器及特定條件下反復(fù)測(cè)試,回歸線的截距不明顯時(shí),才能采用單點(diǎn)校準(zhǔn)法。標(biāo)本用量在3~5μl時(shí),即使加大抗血清用量,濃度與濁度也不成直線關(guān)系,只能用曲線直線化轉(zhuǎn)換后計(jì)算。
④主要干擾因素是血清本身的混濁(如高脂血清),用超離心或脂肪酶水解等標(biāo)本預(yù)處理方法都不實(shí)用。用表面活性劑消濁的作用也有限,所以在測(cè)定中必須作標(biāo)本空白管。除了自動(dòng)分析中可采用兩點(diǎn)法外,手工法用單一試劑而不扣除標(biāo)本空白的做法是錯(cuò)誤的。為了減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)濁度反應(yīng)的影響,必須用定值血清作校準(zhǔn)物。此外,塵埃粒子、比濁皿劃痕等干擾也必須排除。
⑤有的商品試劑盒(包括某些進(jìn)口產(chǎn)品)所附校準(zhǔn)血清定值不準(zhǔn)確,是誤差的重要來(lái)源。
(2)火箭電泳法:
①抗原稀釋倍數(shù)與抗血清用量的選擇,應(yīng)以火箭峰清晰、校準(zhǔn)曲線斜率適中并成直線為宜。本法同時(shí)測(cè)定apoA-Ⅰ與apoB,應(yīng)調(diào)整兩種抗血清用量,使二者峰高有區(qū)別,apoB峰高不小于1cm。
②不同種類來(lái)源的抗血清(如兔與羊),在等效價(jià)的情況下進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果會(huì)有差異。apoA-Ⅰ測(cè)定以兔抗血清為好。用兔血清時(shí)峰形尖細(xì),而羊血清所產(chǎn)生的峰粗,峰尖圓鈍,有時(shí)在峰頂前出現(xiàn)虛影。校準(zhǔn)血清所作校準(zhǔn)曲線斜率也不同。但不論用何種抗血清,定量結(jié)果差別不大。
③在一定條件下電泳,不同稀釋度校準(zhǔn)血清的峰高不會(huì)有明顯變動(dòng),校準(zhǔn)曲線斜率基本一致。如標(biāo)本峰高超出校準(zhǔn)曲線范圍時(shí),應(yīng)調(diào)整標(biāo)本稀釋倍數(shù)后重測(cè)。板間CV通常小于5%。
④火箭電泳結(jié)果可以用染色法或直接肉眼觀察可見(jiàn)的火箭峰。前者用標(biāo)本少,節(jié)省抗血清,但如適當(dāng)增加標(biāo)本及抗血清用量,不染色更為方便。所用瓊脂糖應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)電滲或低電滲的,凝膠中加入適量葡聚糖或聚乙二醇可使火箭峰更清晰。
⑤火箭峰的測(cè)量可以計(jì)算面積或峰高,面積是峰高乘以峰寬(峰半高處的寬度)。測(cè)量精度最好能達(dá)0.1mm。須用機(jī)械或電子放大設(shè)備。標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)峰高以1~4cm為宜。
⑥本法適用于少量標(biāo)本分析。也適用于apoAⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E及Lp(a)測(cè)定。