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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)概述
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction),簡(jiǎn)稱PCR,是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段??煽醋魃矬w外的特殊DNA復(fù)制。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)正常值
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)臨床意義
用于治療感染性疾病,腫瘤及遺傳病
感染性疾病
PCR在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)中最有價(jià)值的應(yīng)用領(lǐng)域就是對(duì)感染性疾病的診斷。理論上,只要樣本有一個(gè)病原體存在,PCR就可以檢測(cè)到。一般實(shí)驗(yàn)室也能檢出10~100基因拷貝,而目前病原體抗原檢測(cè)方法一般需要105-7個(gè)病原體才可檢測(cè)到。PCR對(duì)病原體的檢測(cè)解決了免疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期”問(wèn)題,可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)。
定量PCR研究資料已表明,病原體數(shù)量與感染性疾病病情的輕重程度、傳染性及治療效果均有相關(guān)性。許多研究表明,人類免疫缺陷病毒(HIV)感染后,潛伏期長(zhǎng)短和臨床癥狀輕重與血液中的病毒量顯著相關(guān);也有研究表明,HIV病毒載量低于一定值時(shí),沒(méi)有傳染性。
在乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒定量研究中發(fā)現(xiàn),病毒的數(shù)量與某些藥物的療效相關(guān)。例如,干擾素治療對(duì)肝炎病毒高拷貝者不敏感,低拷貝者敏感;而有些藥物則具有顯著降低病毒高拷貝的作用。
腫瘤
癌基因的表達(dá)增加和突變,在許多腫瘤早期和良性的階段就可出現(xiàn)。PCR技術(shù)不但能有效的檢測(cè)基因的突變,而且能準(zhǔn)確檢測(cè)癌基因的表達(dá)量,可據(jù)此進(jìn)行腫瘤早期診斷、分型、分期和預(yù)后判斷。
幾乎所有慢性骨髓性白血病患者都可檢測(cè)到原癌基因易位導(dǎo)致的BCR/ABL融合基因形成,定量PCR技術(shù)可通過(guò)檢測(cè)BCR/ABL融合基因的表達(dá)確定微量殘余惡性細(xì)胞存在的數(shù)量,以此作為治療效果和估計(jì)復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性的依據(jù)。
一些病毒致癌作用也與病毒載量有關(guān),EB病毒載量的FQ-PCR檢測(cè)結(jié)果已被用于鼻咽癌早期發(fā)現(xiàn)和隨訪。
遺傳病
PCR技術(shù)首次臨床應(yīng)用就是從檢測(cè)鐮狀細(xì)胞和β-地中海貧血的基因突變開始的?;虻耐蛔兒腿笔Ь鶗?huì)引起各種珠蛋白的表達(dá)不平衡,用FQ-PCR檢測(cè)各種珠蛋白基因表達(dá)差異,是地中海貧血診斷的有效手段。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢查方法
1.備齊用物,標(biāo)本容器上貼好標(biāo)簽,核對(duì)無(wú)誤后向患者解釋以取得合作。露出患者手臂,選擇靜脈,于靜脈穿刺部位上方約4~6cm處扎緊止血帶,并囑患者握緊拳頭,使靜脈充盈顯露。
2.常規(guī)消毒皮膚,待干。
3.在穿刺部位下方,以左手拇指拉緊皮膚并固定靜脈,右手持注射器,針頭斜面向上與皮膚成15度~30度,在靜脈上或旁側(cè)刺入皮下,再沿靜脈走向潛行刺入靜脈,見回血后將針頭略放平,稍前行固定不動(dòng),抽血至需要量時(shí),放松止血帶,囑患者松拳,干棉簽按壓穿刺點(diǎn),迅速拔出針頭,并將4.卸下針頭,將血液沿管壁緩緩注入容器內(nèi),切勿將泡沫注入,以免溶血。容器內(nèi)放有玻璃珠時(shí)應(yīng)迅速搖動(dòng),以除去纖維蛋白原;如系抗凝試管,應(yīng)在雙手內(nèi)旋轉(zhuǎn)搓動(dòng),以防凝固;如系干燥試管,不應(yīng)搖動(dòng);如系液體培養(yǎng)基,應(yīng)使血液與培養(yǎng)液混勻,并在血液注入培養(yǎng)瓶前后,用火焰消毒瓶口,注意勿使瓶塞接觸血液。
5.送實(shí)驗(yàn)室檢查。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)注意事項(xiàng)
檢查前準(zhǔn)備:
1.抽血前一天不吃過(guò)于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。
2.體檢前一天 的晚八時(shí)以后,應(yīng)禁食,以免影響第二天空腹血糖等指標(biāo)的檢測(cè)。
3.抽血時(shí) 應(yīng)放松心情,避免因恐懼造成血管的收縮、增加采血的困難。
有暈針史的病人請(qǐng)?zhí)崆罢f(shuō)明,我們將做特別安排。
檢查時(shí)要求:
1.抽血后,需在針孔處進(jìn)行局部按壓3-5分鐘,進(jìn)行止血。注意:不要揉,以免造成皮下血腫。
2.按壓時(shí)間應(yīng)充分。 各人的凝血時(shí)間有差異,有的人需要稍長(zhǎng)的時(shí)間方可凝血。所以當(dāng)皮膚表層看似未出血就馬上停止壓迫,可能會(huì)因未完全止血,而使血液滲至皮下造成青淤。因此按壓時(shí)間長(zhǎng)些,才能完全止血。如有出血傾向,更應(yīng)延長(zhǎng)按壓時(shí)間。
3.抽血后出現(xiàn)暈針癥狀如:頭暈、眼花、乏力等應(yīng)立即平臥、飲少量糖水,待癥狀緩解后再進(jìn)行體檢。
4.若局部出現(xiàn)淤血,24小時(shí)后用溫?zé)崦頋穹?,可促進(jìn)吸收。
不適宜人群:
沒(méi)有不適宜人群。