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間接免疫熒光試驗(yàn)概述
用對(duì)應(yīng)某一種抗原的抗體(這里被稱(chēng)為一抗)與細(xì)胞孵育結(jié)合,在采用對(duì)應(yīng)一抗(也就是抗一抗)的抗體(這里被稱(chēng)為二抗,二抗上偶聯(lián)有熒光素分子)與細(xì)胞孵育結(jié)合后在熒光顯微鏡下觀察。
間接免疫熒光試驗(yàn)正常值
<1:64
間接免疫熒光試驗(yàn)臨床意義
單份血清效價(jià)≥1:64或雙份血清效價(jià)呈4倍增長(zhǎng)或有IgM抗體出現(xiàn)即可診斷為立克次體感染。本法不能區(qū)分患者感染的立克次體的類(lèi)型。特異性抗立克次體的IgM抗體的出現(xiàn)提示新近感染。
間接免疫熒光試驗(yàn)檢查方法
(1) 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上,10min后棄去,使標(biāo)本保持一定濕度?!?br />
(2) 滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液,使其完全覆蓋標(biāo)本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時(shí)間(參考:30min)?!?br />
(3) 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過(guò)0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不時(shí)振蕩。
(4)取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標(biāo)本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
(5)立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度,一般可用“+”表示: (-)無(wú)熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見(jiàn);(++)熒光明亮;(+++ --++++)熒光閃亮。待檢標(biāo)本特異性熒光染色強(qiáng)度達(dá)“++”以上,而各種對(duì)照顯示為(±)或(-),即可判定為陽(yáng)性。
間接免疫熒光試驗(yàn)注意事項(xiàng)
檢查前:抽血前一天不吃過(guò)于油膩、高蛋白食 物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。體檢前一天 的晚八時(shí)以后,應(yīng)禁食,以免影響第二天空腹血糖等指標(biāo)的檢測(cè)?!z查時(shí):應(yīng)放松心情,避免因恐懼造成血管的收縮、增加采血的困難
不適宜人群:沒(méi)有。