血清鈣(Ca2+,Ca)概述
血清中鈣離子濃度。人體內(nèi)的鈣99%以上存在于骨骼和牙齒中。血液中的鈣絕大部分存在于血漿中,血漿鈣有非擴(kuò)散性鈣及擴(kuò)散性鈣兩部分。非擴(kuò)散性鈣與蛋白質(zhì)結(jié)合(大約1g蛋白質(zhì)結(jié)合0.87mg的鈣),約占血漿總鈣的40%~50%,擴(kuò)散性鈣主要為離子鈣(Ca2+),還有小部分的鈣鹽(如檸檬酸鈣,其他有機(jī)酸鈣鹽及碳酸氫鈣等)。非擴(kuò)散性鈣與擴(kuò)散性鈣之間受H+濃度和HCO3-濃度的影響,在生理狀態(tài)下保持平衡。
血清鈣(Ca2+,Ca)正常值
成人2.1~2.75毫摩/升(8.5~11.0毫克/分升)。
兒童2.25~3.0毫摩/升(9.0~12.0毫克/分升)。
血清鈣(Ca2+,Ca)臨床意義
1、增高見于甲狀旁腺功能亢進(jìn)、甲狀旁腺腫瘤、維生素D攝入過多、多發(fā)性骨髓瘤、腫瘤骨轉(zhuǎn)移、急性骨萎縮。
2、減少見于嬰兒手足搐搦癥、甲狀旁腺功能減退、骨質(zhì)軟化癥、鈣及維生素D吸收不良或不足(佝僂病、腹瀉、妊娠后期等)、阻塞性黃疸、急性出血性胰腺炎、腎臟疾病(如慢性腎炎、尿毒癥)、堿中毒以及脫水和酸中毒糾正后(常出現(xiàn)低血鈣)。此外,引起血清白蛋白減少疾病如惡性腫瘤、嚴(yán)重肝病、黑熱病等亦可降低血鈣。
血清鈣(Ca2+,Ca)檢查方法
離子鈣測(cè)定:商品的離子鈣分析儀所用的鈣電極都采用中性載體作鈣電極的活性材料制成聚氯乙烯(PVC)電極膜,電極的壽命約半年左右:pH電極由特殊玻璃毛細(xì)管制成;參考電極采用銀/氯化銀制成。
各種型號(hào)的離子鈣分析儀的試劑配方、試劑用量、操作方法有所不同,一般要進(jìn)行下列步驟。本法以一種國產(chǎn)的離子鈣分析儀為例。
1、接上電源,儀器首先進(jìn)行顯示及電子線路檢測(cè),結(jié)束后即可進(jìn)行二點(diǎn)斜率定標(biāo)。
2、斜率定標(biāo)時(shí),推出吸樣針先后將其浸入盛有低、高二個(gè)濃度斜率定標(biāo)儀的小瓶中,吸取斜率定標(biāo)液,待儀器發(fā)出“嘟”聲后移去。吸樣針推回原處,儀器自動(dòng)進(jìn)行斜率定標(biāo)。
3、定標(biāo)通過后,可進(jìn)行樣品測(cè)量。
(1)毛細(xì)血管血測(cè)量:將毛細(xì)管血混勻,推出吸樣針,取掉兩端塞子,一頭裝上接頭,將接頭另一端裝在取樣針上,按“測(cè)量”鍵至樣品完全充滿樣品測(cè)量腔后,再松開“測(cè)量”鍵,進(jìn)樣泵即停止工作。此時(shí)應(yīng)檢查樣品測(cè)量腔內(nèi)的樣品是否有氣泡,如有氣泡存在,應(yīng)在松開“測(cè)量”鍵8s內(nèi),再按“測(cè)量”鍵,繼續(xù)吸取樣品,直至排除氣泡為止。移去樣品,擦凈吸樣針并推回原位,在進(jìn)樣結(jié)束8s后即顯示測(cè)量數(shù)據(jù)并打印結(jié)果。
(2)血清測(cè)量過程同全血測(cè)量。
4、標(biāo)本測(cè)量結(jié)束,儀器沖洗管路和樣品測(cè)量,沖洗好后即可進(jìn)行下一個(gè)樣品的測(cè)量。
5、在最后一次定標(biāo)或血樣測(cè)量結(jié)束后10min不操作儀器,儀器將進(jìn)入“休眠”狀態(tài)。此時(shí)如需進(jìn)行血樣測(cè)定,必須先進(jìn)行一點(diǎn)定標(biāo)。若沒有血樣測(cè)定,儀器每隔30min自動(dòng)進(jìn)行一次一點(diǎn)定標(biāo)。
血清鈣(Ca2+,Ca)注意事項(xiàng)
1、甲基百里香酚藍(lán)比色法(MTB):
(1)MTB與EDTA有相似的氨羧結(jié)構(gòu),能螯合多種陽離子,但絡(luò)合穩(wěn)定常數(shù)不同。
(2)加入:EDTA的作用,目的在于掩蔽試劑中污染的鈣以及其他的金屬離子。能降低空白管吸光度,提高測(cè)定管吸光度,從而使方法靈敏度提高。
(3)EDTA的用量選擇,絕大部分金屬離子與EDTA的絡(luò)合穩(wěn)定常數(shù)大于鈣,小于鈣的僅是少數(shù)微量元素。限量的EDTA僅能掩蔽試劑中的干擾元素,沒有多余的EDTA絡(luò)合血清鈣,一般加入配試劑中的濃度EDTA99~108μmol/L,最終絡(luò)合顯色反應(yīng)的EDTA濃度50~54μmol/L。
(4)所用的試管清洗后用去離子水浸泡兩次,再烤干備用。清潔管加入試劑后應(yīng)顯一致的淺灰綠色,若顯藍(lán)色則試管表示有鈣污染。
2、鄰甲酚酞絡(luò)合酮直接比色法:
(1)本測(cè)定用血清或肝素抗凝血漿標(biāo)本。不能用鈣螯合劑(EDTA-Na2)及草酸鹽作抗凝劑的標(biāo)本。
(2)鄰甲酚酞是一種酸堿指示劑,在結(jié)構(gòu)上與甲基百里香酚藍(lán)相似,在中性或酸性環(huán)境中無色,僅在堿性溶液中和鈣離子絡(luò)合呈紫紅色。所以pH對(duì)顯色有很大的影響,在pH10.5~12時(shí),此反應(yīng)敏感性最好,故用pH11為宜。
(3)試劑中加入8-羥基喹啉消除鎂的干擾,能特異地絡(luò)合鎂,TritonX-100具有消化蛋白的影響。有的作者,在試劑中還加入氰化物掩蔽其他金屬離子;二甲亞砜消除蛋白影響及抑制鄰甲酚酞絡(luò)合物的解離,從而降低空白液的吸光度;聚乙烯吡咯烷酮亦能消除蛋白質(zhì)、膽紅質(zhì)及磷的干擾。
(4)用來作血清鈣測(cè)定的堿性緩沖液較多,可根據(jù)條件選用,常用的有乙二胺-氰化鉀、乙二胺-醋酸鉀-鹽酸、乙二胺-乙二醇、乙醇胺-硼酸、2-氨基-2-甲基-1-丙醇等。用乙二胺-乙二醇緩沖液測(cè)定呈色穩(wěn)定。乙醇胺-硼酸緩沖容量較大,并能使空白試劑的吸光度保持較低讀數(shù)。2-氨基-2-甲基-1-丙醇無毒,無刺激性,也能使空白管有較低的讀數(shù)。
(5)顯色劑有時(shí)略有結(jié)晶析出,是8-羥基喹啉在水中溶解度很低,易析出結(jié)晶所致,這時(shí)可取上清液應(yīng)用。
3、乙二胺四乙酸二鈉滴定法
(1)測(cè)定標(biāo)本若有黃疸或溶血時(shí),終點(diǎn)不易觀察,則必須將標(biāo)本進(jìn)行處理,首先用草酸鹽將鈣沉淀,再用鹽酸及檸檬酸鈉重溶。
①尚需增加幾種試劑:0.7mol/L草酸銨;0.05mol/L檸檬酸鈉;1mol/L鹽酸。
②按下法操作:吸取血清0.1ml,置于離心管中,加去離子水0.25ml、0.7mol/L草酸銨0.05ml,混勻。置56℃水浴中15min。離心沉淀2000轉(zhuǎn)/分10min。小心傾去上清液,并將離心管倒立于濾紙上吸干。加1mol/L鹽酸及0.05mol/L檸檬酸鈉各0.1ml于離心管中,溶解沉淀。按直接滴定法進(jìn)行滴定及計(jì)算。
(2)鈣指示劑種類繁多,名稱較亂,不同指示劑所顯滴定終點(diǎn)不同,受其他離子干擾的作用也不一樣,鈣紅指示劑終點(diǎn)明顯,且較少受鎂離子等干擾。但本身不穩(wěn)定。要經(jīng)常新鮮配置,加入標(biāo)本內(nèi)后要立即用EDTA-Na2滴定。所用鈣紅為鈣-羧酸鈉,應(yīng)與乙二醛縮雙鄰氨基酚的別名“鈣紅”相區(qū)別。
4、離子鈣測(cè)定:
(1)測(cè)定離子鈣最好用血清。優(yōu)點(diǎn)不參入抗凝劑,減少蛋白對(duì)電極的污染。肝素抗凝全血亦可用于離子鈣測(cè)定,尤其急需要結(jié)果減少了凝血時(shí)間和離心分離血清的時(shí)間。但過量的肝素(30u/ml)能使離子鈣濃度降低3%~5%。
(2)pH改變對(duì)Ca2+影響較大。pH降低能使Ca2+增加,反之能使鈣離子減少,故采到的血標(biāo)本盡可能防止CO2逸出,避免pH增加。
(3)標(biāo)本應(yīng)盡快測(cè)定,最好在采樣后1h內(nèi)完成。全血密封貯存于4℃冰箱可穩(wěn)定6h或更長些時(shí)間。密封在注射器中的血清,若無氣泡存在,室溫可保存1~2h,4℃可保存24h以上。
(4)離子鈣含量還與下列因素有關(guān):
①站立能使離子鈣增高約1%~2%。
②延長靜脈淤血的時(shí)間能使離子鈣增加2%,淤血時(shí)前臂運(yùn)動(dòng)幾分鐘離子鈣可增加8%。
③臥床3~12天足以使離子鈣超出正常范圍。