中和試驗(yàn)概述

中和試驗(yàn) (Neutralization Test)是以測(cè)定病毒的感染力為基礎(chǔ)，以比較病毒受免疫血清中和后的殘存感染力為依據(jù)，來判定免疫血清中和病毒的能力。動(dòng)物受到病毒感染后，體內(nèi)產(chǎn)生特異性中和抗體，并與相應(yīng)的病毒粒子呈現(xiàn)特異性結(jié)合，因而阻止病毒對(duì)敏感細(xì)胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。 

• 檢查部位 其他
• 科室 傳染科
• 相關(guān)疾病 流行性腮腺炎 流行性乙型腦炎 小兒狂犬病 艾滋病 柯薩奇病毒疹 口蹄疫 登革熱
• 相關(guān)癥狀 梅毒感染 梅毒肝 嗜心性病毒感染

中和試驗(yàn)正常值

• 固定血清稀釋病毒法：對(duì)病毒而言，通常中和指數(shù)大于50者判為陽(yáng)性，10～49為可疑，小于10為陰性。
  中和試驗(yàn)正常值：人體處于動(dòng)態(tài)平衡、健康狀態(tài)。 

中和試驗(yàn)臨床意義

• 本試驗(yàn)主要用于①?gòu)拇龣z血清中檢出抗體，或從病料中檢出病毒，從而診斷病毒性傳染病;②用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類型;③測(cè)定抗病毒血清或抗毒素效價(jià);④新分離病毒的鑒定和分型，中和試驗(yàn)不僅可在易感的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行，亦可在細(xì)胞培養(yǎng)上或雞胚上進(jìn)行。試驗(yàn)方法主要有簡(jiǎn)單定性試驗(yàn)、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。 

中和試驗(yàn)檢查方法

• (一)簡(jiǎn)單定性中和試驗(yàn)
  本法主要用于檢出病料中的病毒，亦可進(jìn)行初步鑒定或定型。先根據(jù)病毒易感性選定試驗(yàn)動(dòng)物(或雞胚、細(xì)胞培養(yǎng))及接種途徑。將病料研磨，并稀釋成一定濃度(約100 LD50～1 000LD50或TCID50)。污染的病料需加抗生素(青霉素、鏈霉素各200～1 000單位)，或用細(xì)菌濾器過濾，與已知的抗血清(適當(dāng)稀釋或不稀釋)等量混合，并用正常血清加稀釋病料作對(duì)照?；旌虾笾?7℃1h，分別接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，每組至少3只。分別隔離飼喂，觀察發(fā)病和死亡情況。對(duì)照動(dòng)物死亡，而中和組動(dòng)物不死，即證實(shí)該病料中含有與該抗血清相應(yīng)的病毒。本法亦可用于毒素(如毒毒素)的鑒定和分型。
  (二)固定血清稀釋病毒法
  本法多將病毒作10倍遞增稀釋，分置2列試管，第一列加正常血清(對(duì)照組)，第二列加待檢血清(試驗(yàn)組)。混合后，置37℃作用1h，將各管混合液分別接種選定的試驗(yàn)動(dòng)物，每一稀釋度用3～5只動(dòng)物。接種后，逐日觀察，并記錄其死亡數(shù)，觀察結(jié)束后，計(jì)算LD50和中和指數(shù)(表7-1、表7-2)，本法適用于大量檢樣的檢測(cè)。
  本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體，對(duì)病毒而言，通常中和指數(shù)大于50者判為陽(yáng)性，10～49為可疑，小于10為陰性。
  (三)固定病毒稀釋血清法
  本法用以測(cè)定抗病毒血清的中和價(jià)，將待檢血清2倍遞增稀釋，加等量已知毒價(jià)的病毒液(與血清混合后，每一接種劑量含病毒100LD50)，搖勻后，置37℃作用1h，接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
  注：
  [1] 接種劑量0.1ml，含病毒100LD50。
  [2] 系指與病毒混合后的稀釋度。
  [3] 分母為接種數(shù)，分子為保護(hù)數(shù)。
  [4] PD50為半數(shù)保護(hù)，其計(jì)算法同LD50的計(jì)算。
  (四)空斑減少法
  在細(xì)胞培養(yǎng)上進(jìn)行病毒中和試驗(yàn)，近年來多采用空斑減少法。先將病毒稀釋成適當(dāng)濃度，使每0.2ml含80個(gè)～100個(gè)PFU(空斑形成單位)，與不同稀釋度的待檢血清等量混合，置37℃作用1h～2h，分別測(cè)定PFU，使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價(jià)。見表7-4。
  表7-4 空斑減少法中和試驗(yàn)示例
  注：
  [1] 血清用4倍遞增稀釋。
  [2] 空斑減少50%的血清稀釋度，其計(jì)算法同LD50的計(jì)算。 

中和試驗(yàn)注意事項(xiàng)

• 檢查前禁忌：注意正常的生活飲食習(xí)慣，注意個(gè)人衛(wèi)生。
  檢查時(shí)要求：積極配合醫(yī)生。