蛋白質(zhì)濃度測定概述
蛋白質(zhì)濃度測定是利用化學(xué)或物理方法測定蛋白質(zhì)的濃度,是往往用于計(jì)算純化方法的回收率的重要方法。 雙縮脲法 雙縮脲法是第一個(gè)用比色法測定蛋白質(zhì)濃度的方法,硫銨不干擾顯色, Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵,以及酪氨酸殘基絡(luò)合,形成紫藍(lán)色絡(luò)合物,此物在540nm波長處有最大吸收。雙縮脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測定。
蛋白質(zhì)濃度測定正常值
人體正常值一般是60一80g/L。
蛋白質(zhì)濃度測定臨床意義
異常結(jié)果
1、 雙縮脲法:雙縮脲法是第一個(gè)用比色法測定蛋白質(zhì)濃度的方法,硫銨不干擾顯色, Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵,以及酪氨酸殘基絡(luò)合,形成紫藍(lán)色絡(luò)合物,此物在540nm波長處有最大吸收。雙縮脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測定。
2、Lowry法:Cu+與蛋白質(zhì)在堿性溶液中形成絡(luò)合物,然后這個(gè)絡(luò)合物還原磷鉬磷-磷鎢酸試劑(福林-酚試劑),結(jié)果得到深藍(lán)色物。此法比雙縮脲法靈敏得多,適合于測定20mg/L~400mg/L含量的蛋白質(zhì)溶液。
3、紫外吸收法:大多數(shù)蛋白質(zhì)在280nm波長處有特征的最大吸收,這是由于蛋白質(zhì)中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用于測定0.1~0.5mg/ml含量的蛋白質(zhì)溶液。
需要檢查的人群
有軟弱無力疲乏、困倦,皮膚、黏膜蒼白,注意力不集中的人群。
蛋白質(zhì)濃度測定檢查方法
受試者靜脈采血,及時(shí)分離血清后測定。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:取96孔酶標(biāo)板,加入試劑。試劑加完后,準(zhǔn)確吸取20μl樣品溶液于酶標(biāo)孔中,加入BCA試劑200μl,輕搖,于37℃保溫30-60min,冷卻至室溫后,以空白為對(duì)照,在酶標(biāo)儀上590nm處比色,以牛血清白蛋白含量為橫坐標(biāo),以吸光值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)曲線空白為對(duì)照,根據(jù)樣品的吸光值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品的蛋白質(zhì)含量。
蛋白質(zhì)濃度測定注意事項(xiàng)
檢查前禁忌:檢查前一天不吃過于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。體檢前一天的晚八時(shí)以后,應(yīng)禁食。
檢查時(shí)要求:抽血時(shí)應(yīng)放松心情,避免因恐懼造成血管的收縮、增加采血的困難。測定中,蛋白-染料復(fù)合物會(huì)有少部分吸附于比色杯壁上,實(shí)驗(yàn)證明此復(fù)合物的吸附量是可以忽略的。測定完后可用乙醇將藍(lán)色的比色杯洗干凈。