5.對紅細(xì)胞膜的作用:將兔紅細(xì)胞放入0.60%NaCl溶液中,紅細(xì)胞開始破裂發(fā)生溶血,降低至0.4%時(shí),紅細(xì)胞全部破裂,溶血達(dá)最大值,試驗(yàn)是以0.45%NaCl溶液的紅細(xì)胞溶血作為100%,在上述低滲溶液中加入丹參酮ⅡA磺酸鈉0.1mg/ml,結(jié)果只有34%發(fā)生溶血,證明該藥對紅細(xì)胞膜有一定保護(hù)作用,丹參酮ⅡA磺酸鈉不僅對低滲性紅細(xì)胞膜溶血有保護(hù)作用,而且對熱(50℃)、低pH、皂素性引起溶血和免疫性淋已細(xì)胞參與的羊紅細(xì)胞溶血也有一定作用。結(jié)果表明,丹參酮ⅡA磺酸鈉對5種方法引起的溶血均有明顯的保護(hù)作用,而普萘洛爾只保護(hù)低滲性溶血,對其它4種溶血無明顯對抗作用。用掃描電子顯微鏡觀察結(jié)果表明,正常的紅細(xì)胞大多數(shù)呈典型的雙凹型,在0.5%NaCl溶液中,37℃保溫30分鐘,就見到腫脹而未破裂的紅細(xì)胞和已破裂的紅細(xì)胞殼,少量是類似于三磷酸腺苷耗竭的圓齒狀細(xì)胞,尚見到一些表面有孔狀凹陷或孔狀結(jié)構(gòu)的紅細(xì)胞以及表面有很多起伏的細(xì)胞。在低滲溶液中加入丹參酮ⅡA磺酸鈉、幾乎一半以上的細(xì)胞未見破裂。保持其雙凹形,圓齒狀紅細(xì)胞明顯增多,看不到表面有孔狀凹陷或小的起伏細(xì)胞,提示其保護(hù)作用是由于紅細(xì)胞中腫脹程度的減輕,而不是腫脹后不破裂,可能是細(xì)胞承受切向張力增加所致。
另有報(bào)道,在體外循環(huán)中加入丹參酮ⅡA磺酸鈉,可減少血細(xì)胞的破壞,實(shí)驗(yàn)犬分對照和給藥兩組,當(dāng)建立起部分體外循環(huán),轉(zhuǎn)流結(jié)束即刻取血制成掃描電鏡標(biāo)本,結(jié)果對照組轉(zhuǎn)流前的紅細(xì)胞90%以上呈表面光滑的雙凹圓盤形,少數(shù)為圓齒狀、靶形、口形和不規(guī)則形狀,部分體外循環(huán)轉(zhuǎn)流后,紅細(xì)胞表面圓滑性明顯改變。異常紅細(xì)胞明顯增多。高達(dá)20%,以圓齒形和靶形的增加更為甚,給藥組多數(shù)紅細(xì)胞仍保持正常形態(tài),少數(shù)紅細(xì)胞表面圓滑性變差,但其程度明顯低于對照組,由于體外循環(huán)轉(zhuǎn)流中使血細(xì)胞成分的破壞、造成微小血栓。這對手術(shù)后臟器血液供應(yīng)和恢復(fù)有密切關(guān)系。
6.對呼吸系統(tǒng)的作用:6.1.丹參對平陽霉素(Blromycin)引起肺纖維化的保護(hù)作用:實(shí)驗(yàn)用昆明種小鼠45只。體重18-20g,隨機(jī)分為3組。正常對照組:不作任何處理;單純Bleomycin:氣管內(nèi)注入Bleomycin、0.05ml(0.1mg),第2日起每日肌肉注射生理鹽水0.05ml共l月(星期日停注1次);丹參治療組:從氣管內(nèi)注Bleomycin的第2日起每日肌肉注射丹參注射液0.5ml(星期日停注1次)。注Blemycin后l月,全部處死3組動物。并分別進(jìn)行各項(xiàng)檢查:肺組織學(xué)檢查(5只鼠肺)、氣道灌洗收集BALF(5只鼠肺)及肺羥脯氨酸含量測定(5只鼠肺)。丹參注射液給小白鼠肌肉注射l月,觀察到可明顯抑制BleomycinA5所致的肺纖維化,使肺重、肺系數(shù)明顯減少,肺羥脯氨酸含量明顯減低,肺纖維化病變明顯受到抑制,肺組織僅有少量炎癥細(xì)胞浸潤??梢娫诒緦?shí)驗(yàn)條件下,丹參注射液對肺纖維化的保護(hù)作用是較理想的。
6.2.丹參注射液預(yù)防放射性肺損傷的作用:昆明種小白鼠,體重18-24g,共44只,隨饑分組。以深部x線照射小白鼠右胸部,制成放射性肺損傷動物模型。用藥組與照射前20日開始腹腔注射丹參注射液0.2ml(含生藥0.16g),隔日1次,共10次,各組動物分別于照射后10日及1、3、6月分批處死小鼠、汗胸、取右肺作組織切片,HE,VanGieson染色,鏡下觀察,結(jié)果表明,經(jīng)x線照射后,用藥組的小鼠肺損傷輕、損傷修復(fù)快;而胸腺組織的改變兩組無明顯差別。提示丹參注射液對放射性肺損傷有預(yù)防作用。但對胸腺則無明顯保護(hù)作用、作用機(jī)理可能與丹參具有提高血管內(nèi)皮細(xì)胞對放射線的抵抗力,降低毛細(xì)血管通透性、改善微循環(huán)的功能有關(guān)。
6.3.丹參對大急性出血壞死性胰腺炎致肺早期損傷的保護(hù)作用:實(shí)驗(yàn)采用體重7.5-11kg的犬。隨機(jī)分組,用5%牛磺膽酸鈉1ml/kg逆行胰管注射制作ANNP(急性出血壞死性胰腺炎)模型,然后分別給予丹參(5g/kg)和生理鹽水靜脈滴注。結(jié)果表明,AHNP組早期PaO2,PaCO2、PH無明顯改變,支氣管肺泡灌注液LDH、白蛋白、LPO明顯高于丹參組(P<0.05),透射鏡下可見肺血管內(nèi)皮細(xì)胞壞死,連續(xù)中斷和血管壁缺損、而丹參組肺血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺Ⅱ型上皮細(xì)胞正常,提示丹參具有保護(hù)肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺Ⅱ型上皮細(xì)胞作用,可能是一種氧自由莖的清除劑。
6.4.丹參對油酸性呼吸窘迫綜合癥的預(yù)防作用:雄性Wistar大白鼠62只。體重194.68±22.4g(sX±SD)隨機(jī)分組:A組生理鹽水對照組(n=10);B組油酸實(shí)驗(yàn)組(n-13);C組地塞米松預(yù)防組(n=13);D組丹參預(yù)防組(n=13);A組于尾靜脈注入生理鹽水0.1ml/kg作為陰性對照。B-D組白尾靜脈于5秒內(nèi)注入油酸(0.1ml/kg)。C-D組在注入油酸前15分鐘,分別于腹腔注射地塞米松2mg/kg,丹參注射液1.5g/kg。B組注入油酸前不作任何處理作為陽性對照。注入油酸后6小時(shí)以斷頭法快速處死全部大鼠,立即取出肺組織測肺濕重。求肺系數(shù)記錄肉眼改變,于左、右肺的上下部各取肺組織一塊,如肺的其他部位有特殊病變及病變明顯處,則病變處另取材。標(biāo)本用10%福爾馬林固定,石蠟包埋切片,HE染色,作光鏡觀察。結(jié)果表明,油酸實(shí)驗(yàn)組(B組)及各預(yù)防組各例肺表面雖都有不同程度的出血、充血、實(shí)化灶和梗死灶,但各預(yù)防組肺組織肉眼所見病變明顯輕于實(shí)驗(yàn)組。如果按病變程度將散在點(diǎn)狀病灶、邊緣部病灶及邊緣部伴大斑片數(shù)在病灶分別以輕、中、重三級表示、則油酸組9/13(69%)表現(xiàn)為重度改變,而各預(yù)防組中僅丹參組出現(xiàn)1例重度改變,占丹參組8%;油酸組無一例表現(xiàn)為輕度改變,預(yù)防組C-D組的輕度改變分別為5/13(39%),4/13(31%)和3/13(23%),其余均表現(xiàn)為邊緣部病灶為主。病變以邊緣部最為明顯,可能與末梢動脈栓塞、痙攣有關(guān)。肺系數(shù)結(jié)果顯示油酸組肺系數(shù)明顯大于各預(yù)防組,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異非常顯著(P<0.01),而各預(yù)防組之間比較無顯著性差異(P<0.05)。光鏡觀察可見預(yù)防組病理程度及檢出率小于油膩組。與地塞米松的預(yù)防效果相似。認(rèn)為早期預(yù)防性應(yīng)用丹參可以減輕或預(yù)防呼吸窘迫綜合癥(RDS)的發(fā)生。
7.對血脂和動脈粥樣硬化斑塊形成的作用:7.1.丹參素對內(nèi)源性膽固醇(Ch)合成的抑制作用:兩性霉素B可與動物細(xì)胞膜上的Ch形成復(fù)合物,可使細(xì)胞膜上出現(xiàn)微孔,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。在缺乏外源性Ch供給的條件下,若應(yīng)用Ch合成抑制劑抑制內(nèi)源性Ch的合成則可阻止上述復(fù)合物的形成,使細(xì)胞免受兩性霉素B的殺傷作用,因此實(shí)驗(yàn)預(yù)先用含LPDS的培養(yǎng)液孵育細(xì)胞,使細(xì)胞處于無外源性Ch供給的條件下,此時(shí)將細(xì)胞分為3組,第1組不加Ch合成抑制劑、第2組加已知的高效Ch合成抑制Mevin-olin(6umol),第3組加入不同濃度的丹參素,結(jié)果發(fā)現(xiàn)第1組細(xì)胞幾乎全部死亡,而第2、3組細(xì)胞形態(tài)基本正常,第3組細(xì)胞加入不同濃度丹參素后,MTT反應(yīng)所測得的OD值大小與丹參素濃度在10-100ul/孔濃度范圍內(nèi)呈量效關(guān)系(1/=0.023±0.00007x,r=0.97),即與存活細(xì)胞數(shù)之間呈正比關(guān)系。
7.2.丹參素對氧化低密度脂蛋白(LDL)生成的影響:根據(jù)Wieland的方法改良制備,加丹參素制備的氧化LDL稱之丹參素-OLDL;不加丹參素等抗氧化劑制備的氧化LDL稱之OLDL,加維生素E制備的氧化脂蛋白稱之維生素E-OLDL。按Schuh等人的方法測定,Ex515nm,Em553nm。結(jié)果表明,天然LDL(NLDL)及丹參素-OLDL的電泳遷移率均小于OLDL且有顯著性差異(P<0.05),而丹參素-OLDL與NLDL相比無顯著性差異(P>0.05)。各種LDL中脂質(zhì)過氧化物(以MDA表示)含量見表18,丹參素-OLDL中MDA含量顯著低于)LDL組,丹參素-OLDL中MDA含量稍低于VE-OLDL組,但二者無顯著性差異,提示丹參素可用于動脈粥樣硬化的防治。
8.抗菌、消炎作用:8.1.總丹參酮的抗菌作用:在體外抗菌試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),丹參的乙醚提取物總丹參酮對金黃色葡萄球菌和其耐藥菌株有較強(qiáng)的抑菌作用??偟⑼泻?0個(gè)單體成分,分別進(jìn)行抑菌試驗(yàn),其中隱丹參酮、二氫丹參酮Ⅰ、羥基丹參酮Ⅱ-A、丹參酮ⅡB和丹參酸甲酯有抑菌作用。丹參酮ⅡA、丹參酮Ⅰ、丹參新醌甲、乙和丙無抑菌作用??偟⑼獙εR床分離出的8株耐青霉素、鏈霉素和金霉素的金黃色葡萄球菌和50株耐紅霉素金黃色葡萄球菌亦均敏感??偟⑼淖畹鸵志鷿舛龋?2.5ug/ml)比小檗堿最大濃度(500ug/ml)的抑菌力還強(qiáng)。總丹參酮及其單體對人型結(jié)核桿菌H37RV均有不同程度的抑菌效果,尤以丹參新醌甲的效果為最強(qiáng)。從化學(xué)結(jié)構(gòu)與抑制人型結(jié)核菌活性關(guān)系的研究結(jié)果表明,屬菲醌類的丹參酮Ⅰ、屬鄰醌類的隱丹參酮和介于兩者之間的丹參酮ⅡA,均有較強(qiáng)的活性。認(rèn)為二萜醌類成分的抑菌作用需要有一定的脂溶性。若母核上引入極性基團(tuán)則活性降低??偟⑼?5-50ug/ml濃度時(shí),對鐵銹色毛發(fā)癬菌和紅色毛發(fā)癬菌也有抑制作用。以金霉素的閾下治療量和2%總丹參酮懸液0.5ml合并應(yīng)用。表明丹參酮可以加強(qiáng)金霉素對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護(hù)作用。
8.2.丹參酮對大白鼠關(guān)節(jié)腫的抑制作用:8.2.1.對大白鼠蛋清性關(guān)節(jié)腫的影響:體重200-230g雄性大白鼠20只,隨機(jī)分成兩組:給藥組每只灌胃2%丹參酮混懸液2.0ml;對照組給等量的淀粉懸液。實(shí)驗(yàn)前l(fā)日,預(yù)防給藥2次,間隔7小時(shí)。給藥后l日預(yù)防給藥2次,間隔7小時(shí)。給藥后l小時(shí)向大鼠右后足掌皮內(nèi)注入新鮮蛋清0.1ml,注射后立即測量左側(cè)踝關(guān)節(jié)周長。在注入蛋清后1、2、3、4、5和6小時(shí)各測量一次腫脹的右踝關(guān)節(jié)周長,左右周長之差為腫脹程度,在各時(shí)間內(nèi)兩組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,結(jié)果說明丹參酮有明顯地抑制大白鼠蛋清性關(guān)節(jié)腫的作用。
8.2.2.對大白鼠角叉菜膠關(guān)節(jié)腫的影響:體重170-220g雌性大白鼠20只,隨機(jī)分成兩組。給藥組在實(shí)驗(yàn)前預(yù)防給2%丹參酮懸液兩日,每天2次,間隔7小時(shí),每只每次灌胃2.0ml。對照組給等量的淀粉懸液。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日給藥后30分鐘向大白鼠右后足掌皮下注射l%角叉菜膠0.1ml,注入致炎劑后立刻以排水法測量左足的體積,致炎后1、2、3、4、5和6分鐘各測量右足體積一次,在第3小時(shí)測時(shí)后再給藥1次,給藥組與對照組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。結(jié)果表明,丹參酮對角叉菜膠引起的大白鼠關(guān)節(jié)腫有明顯的抑制作用,所測各時(shí)間結(jié)果都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
8.2.3.對大白鼠右旋糖酐關(guān)節(jié)腫的影響:體重170-200g雌性大白鼠20只,隨機(jī)分成兩組。給藥方法同角叉菜膠關(guān)節(jié)腫的實(shí)驗(yàn)。每鼠右后足掌皮下注射6%右旋糖酐0.1ml致炎,致炎后1、3、5和7小時(shí)重測大白鼠右后足體積,以各時(shí)間的右足體積減去左足體積為腫脹程度,兩組腫脹程度在1、3、5和7小時(shí)內(nèi)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明丹參酮對右旋糖酐所致大白鼠關(guān)節(jié)腫有明顯的抑制作用。
8.2.4.對大白鼠甲醛性關(guān)節(jié)腫的影響:體重180-230g雌性大白鼠20只,分成兩組。給藥方法完全同角叉菜膠關(guān)節(jié)腫實(shí)驗(yàn)。致炎劑為2.5%甲醛0.1ml。致炎后1、3、5、7、24、48、72及96小時(shí)各測1次右足體積。結(jié)果表明:1小時(shí)兩組沒有明顯差別,3、5、7、24及48小時(shí)各時(shí)間內(nèi)兩組差別均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。72小時(shí)對照組己開始自行恢復(fù),96小時(shí)恢復(fù)更迅速。說明丹參酮對甲醛所致亞急性關(guān)節(jié)腫有明顯的抑制作用。
8.2.5.對大白鼠感染性關(guān)節(jié)腫的實(shí)驗(yàn)治療作用:雄性大白鼠,體重120-160g,每組10只。菌液和藥物均同小白鼠實(shí)驗(yàn)治療項(xiàng)。將培養(yǎng)18小時(shí)菌液做1:1稀釋后備用。于實(shí)驗(yàn)前1日,分組后灌胃給藥2次,間隔6小時(shí),每次每只2ml。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天早晨再灌胃給藥2ml,l小時(shí)后取0.1ml制備的菌液皮內(nèi)注入大白鼠左腳掌,3小時(shí)后測量關(guān)節(jié)周長,將給藥組與對照組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,結(jié)果表明,總丹參酮對大白鼠感染性關(guān)節(jié)腫有較明顯的抑制作用。
8.3.丹參注射液對角叉菜膠致大鼠足跖部水腫的抑制作用:Wistar大白鼠,體重180-250g,分為兩組。治療組肌肉注射丹參注射液1ml,30分鐘后于足跖部皮下注入1%角叉菜膠0.1ml,對照組肌肉注射等量生理鹽水。結(jié)果可見丹參注射液可使水腫明顯減輕,腫脹抑制率達(dá)51%。
8.4.對大白鼠甲醛性腹膜炎的影響:體重170-200g雄性大白鼠20只,分成兩組。每鼠腹腔注入2%甲醛液1.0ml,36小時(shí)后處死,抽出腹腔滲出液并記錄液量。兩組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。給丹參酮組于注入甲醛前30分鐘給藥1次。次日再給藥2次,間隔7小時(shí)。結(jié)果表明:丹參酮對甲醛所致的大白鼠腹膜炎有明顯的抗?jié)B出作用。丹參的抗炎作用機(jī)制不甚清楚,有人報(bào)道丹參注射液對大鼠中性粒細(xì)胞趨化性明顯減低,并抑制溶酶體酶的釋放,可能是丹參抗炎作用環(huán)節(jié)之一。另有報(bào)道,用人白細(xì)胞與總丹參酮共同孵育l小時(shí),可明顯抑制白細(xì)胞趨勢化性(Chemotaxia,即白細(xì)胞向趨化因子方向移動的有方向的運(yùn)動),而對白細(xì)胞的隨機(jī)運(yùn)動(Randommotility,即白細(xì)胞所固有的不受趨化因子影響的無方向的運(yùn)動)無影響。若延長孵育時(shí)間至19小時(shí),則5ug/ml的總丹參酮已足以明顯抑制白細(xì)胞趨化性及隨機(jī)運(yùn)動,抑制率分別為79和81%。這一結(jié)果與丹參酮明顯抑制體內(nèi)白細(xì)胞向炎癥區(qū)的游走相一致。另從丹參酮的大鼠血中所測定PGF2a和PGE水平明顯降低,進(jìn)一步揭示了丹參的抗炎機(jī)制。
9.對肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用:9.1.丹參對實(shí)驗(yàn)性肝再生的影響:實(shí)驗(yàn)動物為大白鼠,體重180-220g,雌雄兼用。動物分為兩組。于實(shí)驗(yàn)第1日上午9-11小時(shí),除正常組外,全部動物在乙醚麻醉下,行部分肝切除術(shù),切除肝臟左葉及中葉(約占肝重68%),稱重。術(shù)后當(dāng)天下午及次日上午給藥組分別給藥,經(jīng)皮下注射1ml/只。實(shí)驗(yàn)第44小時(shí),腹腔注射秋水仙堿1ml/只(含0.2mg)、48小時(shí),全部處死動物。取血清作谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)測定(改良金氏法),應(yīng)用反向血凝法檢測甲胎蛋白(AFP)。稱肝重,計(jì)算再生度。取小塊肝組織固定于10%福爾馬林液,石臘包埋,蘇木素-伊紅染色,鏡檢作組織學(xué)觀察,并計(jì)算核分裂指數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,丹參可使肝再生度、核分裂相指數(shù)、AFP檢出率均增高,說明丹參具有促進(jìn)肝再生的作用。至于其作用機(jī)理,可能與丹參改善血液循環(huán)的作用有關(guān)。在全身及局部組織血液循環(huán)改善的基礎(chǔ)上,使門脈血流增加,改善肝臟供血和營養(yǎng),可能是促進(jìn)肝臟再生的重要因素。肝臟再生受到多種激素的調(diào)節(jié),尤其是胰島素和胰高血糖素具有明顯促進(jìn)肝再生的作用。丹參等活血化瘀藥物改善血液循環(huán)。同時(shí)可帶來較多的胰島素和胰高血糖素,在促進(jìn)肝再生中亦可能有一定作用。
9.2.丹參對大鼠急性肝損傷的作用:取大白鼠,體重200-260g,雌雄兼用。實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行。即正常組、肝損傷組以及丹參給藥組,各組8只大鼠。實(shí)驗(yàn)第1、5日除正常組外,其余2個(gè)組均皮下注射四氯化碳0.5ml/100g體重,自實(shí)驗(yàn)第2日起各治療組動物開始給藥,肝損傷組給以等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)第7日下午6小時(shí)全部動物禁食,次晨6小時(shí)以50%葡萄糖灌胃,每只動物2ml。2小時(shí)后處死動物,迅速切取部分肝臟作糖原和甘油三酯測定;其余肝臟部分分別用10%福爾馬林液固定,進(jìn)行蘇木精一伊紅染色(HE)和用Carnoy液固定,PAS法顯示糖原。取血清進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)和B脂蛋白測定。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,丹參組較肝損傷組SGPT活力明顯降低(P<0.01);肝內(nèi)甘油三酯含量與肝損傷組相比較,僅丹參組有明顯降低(P<0.05);血清B脂蛋白測定結(jié)果表明,各給藥組與肝損傷組相比均無明顯差異。給藥組肝勻漿糖原含量與肝損傷組相似(P>0.05)。組織化學(xué)染色所顯示的肝糖原含量與上述測定結(jié)果大體一致。病理組織學(xué)觀察亦表明,丹參可明顯減輕肝壞死和炎癥反應(yīng)(P<0.05和P<0.01)。
9.3.丹參對實(shí)驗(yàn)性肝硬變的防治作用:取大白鼠,體重200-320g,雌雄兼用,按前述實(shí)驗(yàn)分組。除正常組外,各組均飼單純玉米面,混以0.5%的膽固醇(前2周加豬油20%),以30%乙醇為飲料。于實(shí)驗(yàn)第1日,除正常組外,其余各組每只動物皮下注射四氯化碳0.5ml/100g體重,以后每隔3日皮下注射油劑四氯化碳(40%植物油溶液)0.3ml/100g體重。從實(shí)驗(yàn)第5周開始,給藥組分別給予中藥,對照組給等量生理鹽水,至第9周末處死動物。取血清作蛋白電泳分析、SGPT及胎兒甲種球蛋白(AFP)檢測(反向血凝法)。取肝臟左葉固定于10%福爾馬林液中,作蘇木精一伊紅染色(HE)及膠原纖維染色(VG);其余肝臟部分留作羥脯氨酸測定,以求膠原蛋白含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,丹參給藥組能明顯降低膠原蛋白含量(P<0.01)及血清r球蛋白含量。羥脯氨酸是膠原降解的產(chǎn)物,經(jīng)尿排出,因此測定尿羥脯氨酸量可反應(yīng)肝內(nèi)膠原降解的速度。
另有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,經(jīng)丹參治療3周后,大白鼠尿羥脯氨酸排泄量明顯高于對照組,間接證明丹參可促進(jìn)膠原纖維的降解。體內(nèi)膠原分解主要是通過膠原酶的作用,在中性環(huán)境中,經(jīng)膠原酶作用,可將膠原蛋白裂解為兩部分,一部分為大的3/4,一部分為小的1/4,裂解后的碎片,再經(jīng)非特異性蛋白酶作用逐漸分解。因此,膠原降解的關(guān)鍵與膠原酶的作用密切相關(guān)。丹參促進(jìn)膠原降解可能是通過增加膠原酶的產(chǎn)生或增強(qiáng)膠原酶的活性而實(shí)現(xiàn)的。
9.4.丹參對肝纖維重吸收的作用:實(shí)驗(yàn)取大白鼠23只,體重170-210g,雌雄兼用,分成肝硬化對照組。給藥組及正常對照組。實(shí)驗(yàn)第l日,前兩組動物皮下注射四氯化碳40.5ml/100g體重,以后每隔3日皮下注射油劑四氯化碳(40%植物油溶液)0.3ml/100g體重。單純玉米面(前2周加入20%豬油)加入0.5g%膽固醇為飼料,30%酒精為唯一飲料。實(shí)驗(yàn)第9周,撤除上述全部病因刺激,恢復(fù)正常膳食及飲水,給藥組開始給藥,肝硬化對照組給生理鹽水。于給藥后1、2、3周末收集各組動物16小時(shí)尿,測定尿羥脯氨酸含量。于實(shí)驗(yàn)第ll周末斷頭處死全部動物。制片用JEM100CX型電鏡觀察。其余肝組織留作肝羥脯氨酸測定,以計(jì)算肝膠原蛋白含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,經(jīng)丹參治療的動物,肝纖維化較對照明顯減輕,且肝臟膠原蛋白含量亦明顯低于對照組。說明藥物有促進(jìn)肝纖維重吸收的作用。至于丹參減輕肝纖維化的機(jī)理尚不清楚,就現(xiàn)有資料認(rèn)為,丹參抑制纖維增生與丹參促進(jìn)壞死肝細(xì)胞的修復(fù)和及時(shí)再生有關(guān)。
9.5.丹參注射液對大鼠部分肝切除后肝臟再生的影響:取雌性Wistar大白鼠,體重140-190g,飼以一般飲食,手術(shù)前后不禁食水。術(shù)前稱體重,在輕度乙醚麻醉下行肝左時(shí)及正中葉切除術(shù),并將切除之肝臟稱重。手術(shù)均在上午8:30-11:30之間進(jìn)行。術(shù)后動物隨機(jī)分為6組:用藥組按術(shù)后處死時(shí)間24、48及72小時(shí)分為3組,對照組亦按處死時(shí)間分為3組。于述后當(dāng)日起,每天下午4點(diǎn)給各用藥組動物腹腔注射丹參注射液0.66ml/只。分別于手術(shù)后24小時(shí)、48小時(shí)及72小時(shí)將各組動物在乙醚麻醉下處死。取出全部殘留肝臟,觀察丹參注射液對大鼠部分肝切除后肝臟DNA合成率、DNA含量、肝細(xì)胞標(biāo)記核數(shù)、肝細(xì)胞分裂相以及再生肝重變化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明丹參注射液能夠促進(jìn)肝臟再生時(shí)的DNA合成和細(xì)胞分裂增殖過程,具有一定的促進(jìn)肝再生作用。丹參的這種作用可能是通過改善肝臟局部血液循環(huán),加強(qiáng)肝再生內(nèi)在因素的作用而實(shí)現(xiàn)的。
戚心廣等觀察了丹參等對實(shí)驗(yàn)性肝損傷大鼠的肝細(xì)胞的保護(hù)作用,通過肝損傷大鼠肝的光鏡及電鏡的病理變化及其血漿纖維聯(lián)結(jié)蛋白水平的消長,顯示出丹參可以刺激大鼠血漿纖維聯(lián)結(jié)蛋白(PFN)水平的升高,從而提高其網(wǎng)狀內(nèi)層系統(tǒng)的吞噬功能及調(diào)理素活性,防止肝臟的免疫損傷,達(dá)到保護(hù)肝細(xì)胞和促進(jìn)肝細(xì)胞再生的作用。近年來,許多學(xué)者證實(shí)血漿PFN是單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的主要調(diào)理素,其主要功能之一是作為網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬作用的一種介質(zhì),對內(nèi)毒素及許多損肝因子有調(diào)理作用。提示丹參不單純是改善肝臟微循環(huán),供給肝臟有益因子,更重要的是丹參可以提高PFN水平,增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能和調(diào)理素活性,避免肝臟免疫損傷,最終起到保護(hù)肝細(xì)胞和促進(jìn)肝細(xì)胞的再生作用。
10.促進(jìn)組織修復(fù)和再生的作用:10.1.丹參注射液對小鼠骨折愈合中鈣沉積的影響:實(shí)驗(yàn)用成年雄性健康小鼠。體重25-35g,以45Ca沉積量為指標(biāo)觀察骨形成的速度。用自制骨折器造成小鼠右股骨中段閉合骨折,骨折后每天給予丹參注射液0.5ml(口服)。給藥后5、7、9、13分別處死小鼠。處死前48小時(shí)尾靜脈注射0.2ml45Ca一氯化鈣溶液,測定左右股骨及右脛骨上、中、下三段的放射活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常小鼠,左右骨相應(yīng)部位鈣沉積相似;右股骨中段骨折后,生理鹽水組與丹參組小鼠的中段股骨鈣沉積不斷升高,而股骨上、下二段反而下降,丹參組下降更顯著。說明丹參可以從鄰近骨組織中調(diào)動比生理鹽水更多的鈣,以更好的滿足新骨形成對鈣的需要,從而使骨折愈合加速。
劉季蘭等采用C57BL純種成年健康小白鼠,觀察了丹參注射液對小鼠骨折愈合中鈣再吸收的影響。結(jié)果表明,正常小鼠左右股骨及脛骨上段的放射活性均隨時(shí)間而不斷下降;注射45Ca后不同時(shí)間造成右股骨中段骨折后,生理鹽水組小鼠骨折部位的放射活性卻低于相應(yīng)健側(cè);丹參組小鼠中這種變化變得更為顯著。通過電子顯微鏡觀察,發(fā)現(xiàn)使用丹參注射液后,可使家兔骨折部位骨痂形成提前,且更為致密。骨生成細(xì)胞分布部位及數(shù)量增加;成纖維細(xì)胞除有外形改變外,細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成活動更為旺盛,細(xì)胞的正常變性過程也加快,細(xì)胞外膠原纖維增多,并進(jìn)入成纖維細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi);有增多的破骨細(xì)胞出現(xiàn)在不同的骨痂部位,促進(jìn)骨的改建,另外,成纖維細(xì)胞腫脹的線粒體內(nèi)出現(xiàn)眾多的致密鈣顆粒,從而使骨痂有更多更早的鈣鹽沉積。家兔前肢橈骨骨折實(shí)驗(yàn)中也證明丹參可促進(jìn)骨折愈合。
10.2.丹參注射液對雞胚額骨分離細(xì)胞培養(yǎng)生長的影響:雞胚額骨分離細(xì)胞的制備,采用孵育12日的Leghorn雞胚額骨(除去骨外膜),經(jīng)剪碎清洗、胰酶消化后過濾,濾液即為雞胚額骨分離細(xì)胞懸液。經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)總共獲得約3x103個(gè)細(xì)胞。用EagleMEMNissui(1)培養(yǎng)液,簡稱Eagle培養(yǎng)液(含20%小牛血清)稀釋至10ml,分裝于5個(gè)培養(yǎng)瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預(yù)先各放2條載玻片條),每瓶2ml。然后分別再加Ea-gle、0.8%丹參Eagle、0.4%丹參Eagle、0.2%丹參Eagle及0.1%丹參Eagle培養(yǎng)液各2ml。分別稱為對照組和0.8、0.4、0.2及0.1丹參組5組,在38℃二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。每周各換相應(yīng)培養(yǎng)液3次,逐日用倒置顯微鏡觀察。培養(yǎng)至26日標(biāo)本被收獲,分別染色,和堿性磷酸酶-酸性磷酸酶反應(yīng)(簡稱Alp-Acp反應(yīng)),作各組間比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,丹參能促進(jìn)骨細(xì)胞樣細(xì)胞成熟,分泌膠原性物質(zhì)和AIP,并使鈣鹽在膠原基質(zhì)上沉積,形成骨小結(jié)節(jié)。但是濃度過高能導(dǎo)致對成骨細(xì)胞樣細(xì)胞生長的抑制。
10.3.丹參對家兔皮膚切口愈合的影響:實(shí)驗(yàn)用體重為2-3kg的雄性家兔,分對照組;和為丹參組。所有家兔右上肢用電剪剃毛,在戊巴比妥鈉靜脈麻醉(30mg/kg)及無菌技術(shù)下作右前壁中下1/3部位掌面皮膚全層縱行切口,長約1.5cm,皮膚切口作間斷縫合。手術(shù)當(dāng)天起對照組每天肌肉注射生理鹽水2ml。丹參組每天注射同一批號丹參注射液2ml。注射最多不超過13針,宰殺當(dāng)天停止注射。對照組于術(shù)后1-10日以及17、21、25、30日各取家兔2只作系列觀察;用藥組于述后第1、3、5、7、9、13、17、21、25、30日各取家兔2只作組織學(xué)和組織化學(xué)對比觀察。結(jié)果表明,丹參組的巨噬細(xì)胞及成堆異物巨細(xì)胞的出現(xiàn)均早于對照組,使創(chuàng)傷修復(fù)的清掃階段明顯提前,持續(xù)出現(xiàn)豐富而充血的毛細(xì)血管,另外,丹參組的血管性肉芽組織、膠原性肉芽組織以及疤痕性肉芽組織的出現(xiàn)均于顯著早于對照組,說明由于應(yīng)用丹參產(chǎn)生了活血化瘀作用,促進(jìn)了皮膚切口愈合。
丹參的活血化瘀作用可促進(jìn)組織修復(fù)和再生,如加快骨折和皮膚創(chuàng)傷的愈合都可能與它的改善微循環(huán)障礙和血液流變學(xué)等作用有關(guān),致使局部血流供應(yīng)增多和營養(yǎng)增加,促進(jìn)組織的修復(fù)和再生。還可能通過內(nèi)在調(diào)節(jié)機(jī)制而影響機(jī)體的反應(yīng)性。
11.抗腫瘤作用:11.1.丹參對大鼠Walker256癌細(xì)胞血行播散的影響:取年幼健康大鼠,體重65-85g,雄性。每支丹參注射液2ml含生藥3g。用Walker256癌細(xì)胞腹水型,在無菌條件下,抽取少量癌性腹水,經(jīng)血球計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)后,用生理鹽水稀釋成1-3X105/0.2ml濃度。于大鼠尾靜脈注射l-3X105個(gè)Walker256癌細(xì)胞。癌細(xì)胞接種前l(fā)小時(shí)或后24小時(shí)。腹腔注射丹參注射液1-2.0ml,每日注射,連給4-5日。接種癌細(xì)胞后14-20日處死動物,稱取體重、肺重,并在解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)肺臟表面轉(zhuǎn)移病灶的數(shù)目。個(gè)別鼠還測定了紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及紅細(xì)胞比積。4批實(shí)驗(yàn)結(jié)果與對照組比較,發(fā)現(xiàn)注射丹參注射液后,大鼠體重明顯減輕,貧血嚴(yán)重,肺重及肺重/體重之比增加,肺臟表面腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目增加。實(shí)驗(yàn)還觀察到丹參注射液不論注射1ml,1.5ml或2.0ml,每日1次,連結(jié)4-5日,也不論在接種前l(fā)小時(shí)或(和)接種后24小時(shí)給藥,均能促進(jìn)Walker256癌細(xì)胞從血循環(huán)轉(zhuǎn)移至肺臟等組織生長。除肺臟外尸解時(shí)觀察到其它臟器表面也可見到1-2個(gè)腫瘤轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:丹參注射液靜脈注射對大鼠Walker256癌細(xì)胞血行插散確有促進(jìn)作用。由于癌腫轉(zhuǎn)移機(jī)制復(fù)雜,至今尚未完全闡明。丹參注射液靜脈注射對大鼠Walker256癌細(xì)胞血行播散的影響不一定適合人類的情況。因此,丹參注射液靜脈注射對人類腫瘤以及其它實(shí)驗(yàn)性動物腫瘤轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制值得進(jìn)一步研究。
11.2.丹參與環(huán)磷酰胺合用對小鼠肉瘤180的治療作用:給小鼠S-180單獨(dú)應(yīng)用用丹參注射液(4、5g/kg)或小劑量環(huán)磷酰胺(5mg/kg和8mg/kg),對S-180腫瘤的生長沒有明顯影響。但當(dāng)兩藥合并應(yīng)用則加強(qiáng)了對腫瘤的抑制作用。與對照組比較P值(0.01-<0.001。單獨(dú)應(yīng)用環(huán)磷酰胺組抑瘤率為15.7%-29.4%。除抑瘤率為17.9%的一組動物經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理與對照組瘤重有顯著差別(P<0.05)外,另兩批實(shí)驗(yàn)均與對照組無明顯差別。丹參與環(huán)磷酰胺并用組抑瘤率32.6-46.7%,與單用環(huán)磷酰胺組有顯著差別,兩批實(shí)驗(yàn)中P值<0.05,另一批實(shí)驗(yàn)P>0.1。為了對丹參與環(huán)磷酰胺合用時(shí)的增效作用機(jī)理進(jìn)行探討,測定了瘤組織內(nèi)核酸含量。觀察在合并用藥時(shí)瘤組織核酸含量的改變與單獨(dú)用藥有無差別,結(jié)果丹參注射液4.5g/kg-9.0g/kg對S-180瘤組織內(nèi)DNA含量一般無明顯影響,當(dāng)與小劑量環(huán)磷酰胺合用,在部分實(shí)驗(yàn)中看到了協(xié)同作用,使瘤組織內(nèi)DNA含量明顯減少。但在另一些實(shí)驗(yàn)中則DNA減少并不顯著,單用丹參或與環(huán)磷酰胺合用,對瘤組織RNA含量沒有影響。
11.3.丹參合并環(huán)磷酰胺對615小鼠白血病和艾氏腹水癌小鼠的治療作用:應(yīng)用丹參注射液與環(huán)磷酰胺合用治療615小鼠白血病,在所用劑量下未看到合并用藥有增效作用。對艾氏腹水癌的治療則顯示不利的影響。在4.5g/kg和9.0g/kg劑量下,使動物存活時(shí)間明顯縮短,且腹水量比對照組增多。
11.4.丹參對C57BL小鼠Lewis肺癌自發(fā)肺轉(zhuǎn)移的影響:C57BL小鼠肌肉接種Lewis肺癌細(xì)胞,接種后腹腔注射丹參(9.0g/kg)12-15次,于第3周處死,計(jì)算肺部轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目及稱原發(fā)瘤重量。結(jié)果表明,丹參對Lewis肺癌細(xì)胞的自發(fā)轉(zhuǎn)移有明顯促進(jìn)作用,但對原發(fā)瘤生長沒有影響。另外,接種Lewis肺癌的C57BL小鼠血清內(nèi)唾液酸含量較正常鼠明顯增加。接種瘤細(xì)胞后同時(shí)應(yīng)用丹參的小鼠。血清唾液酸早期略有升高,但隨而降至正常水平。顯示丹參對血清唾液酸的升高有抑制作用。丹參9.0g/kg對Lewis肺癌細(xì)胞唾液酸含量有抑制作用(P<0.05-0.02),4.5g/kg時(shí)抑制作用不明顯。
11.5.丹參注射液對Ehrlich腹水癌細(xì)胞表面的作用:取體重為20-30g雄性小鼠6只,分成兩組,實(shí)驗(yàn)組與對照組各3只。全部動物腹腔接種Ehrlich腹水癌細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組于接種后第4日開始腹腔注射丹參注射液50mg/10g體重,連續(xù)給藥4日。對照組于同期內(nèi)腹腔注射滅菌生理鹽水。動物在接種癌細(xì)胞后第8日取腹水。制作的標(biāo)本經(jīng)電鏡觀察表明,丹參對癌細(xì)胞表面有很強(qiáng)的作用,它能阻止植物凝集素與癌細(xì)胞表面受體發(fā)生作用。用正電荷鐵蛋白作為標(biāo)記物研究細(xì)胞表面電荷的變化,發(fā)現(xiàn)丹參除了可增加艾氏腹水癌細(xì)胞表面電荷密度外,并可改變電荷的分布。因?yàn)榧?xì)胞表面電荷密度的增加,使細(xì)胞間的排斥力增大,細(xì)胞間的粘著力降低,結(jié)果是細(xì)胞易于游離而擴(kuò)散,以此現(xiàn)象來解釋丹參促進(jìn)腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散的一個(gè)原因,另外,也發(fā)現(xiàn)丹參可改變癌細(xì)胞微絨毛表面積在全部質(zhì)膜表面中所占比例的下降,以及微絨毛極化現(xiàn)象的增加,提示丹參可活化腫瘤細(xì)胞增加運(yùn)動性,也影響腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。關(guān)于丹參抗腫瘤和促腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制不甚清楚,有人認(rèn)為,丹參的抗腫瘤機(jī)制可能與調(diào)整腫瘤宿主凝血-纖溶-血小板系統(tǒng)的功能紊亂及對宿主免疫系統(tǒng)的正性影響有關(guān),并且通過對核酸代謝的影響對腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用,但有待進(jìn)一步研究確證。
12.對環(huán)腺苷酸磷酸二酯酶的作用:為了解家兔組織中目的酶活力在個(gè)體上的差異,實(shí)驗(yàn)用健康家兔10只分別測定了各臟器中CAPD的活力。家兔擊頭昏厥后,斷頭,立即取出腦、心、腎,置碎冰中。于4℃以下,按只按臟器分別作成勻漿及其上清液。CAPD的測定結(jié)果,以活力單位的均值和標(biāo)準(zhǔn)差表示如下:腦:0.741±0.070;腎:0.294±0.043;心:0.033±0.011。(活力單位是指測定條件下10mg鮮組織,10分鐘內(nèi)分解的cAMP的umol數(shù))。
在觀察丹參的水提取液對動物各組織的抑制效應(yīng)時(shí),為避免動物個(gè)體差異、實(shí)驗(yàn)以家兔等動物3只,按臟器成批制得的勻漿上清液(35,000g)為酶源,進(jìn)行觀察。每種組織CAPD的測定分成兩組:丹參組,每個(gè)測定加入丹參水提液(每1ml相當(dāng)生藥0.5g)10ul(含有機(jī)物133ug);對照組(即正常組),不加丹參提出物。每組測定重復(fù)2次。丹參水溶性成分對被測各組織中的CAPD均表現(xiàn)抑制作用。酶反應(yīng)系中加入上述丹參水溶液10ul即引起CAPD的活力下降15-68%。這種抑制作用在實(shí)驗(yàn)動物的組織之間差異很大。其中,以平滑肌為主的子宮和膀胱以及大腦和肺中的CAPD對丹參提出物最為敏感,抑制比率較大,肝、腎CAPD對丹參的反應(yīng)最差,而脾、心等組織則介于二者之間。以酶作用動力學(xué)的研究指出,丹參水溶性成分對兔腦CAPD表現(xiàn)為典型的非競爭性抑制,并且是不可逆抑制,丹參水溶性提出物用硅膠G薄層層析可檢出16個(gè)斑點(diǎn),用有機(jī)溶劑進(jìn)行初步分離,測定各個(gè)分離部分提純的兔腦CAPD的量-效曲線,求出50%抑制劑量,結(jié)果(1)在丹參水溶性成分中,極性較小的各點(diǎn),如部分3(主要是斑點(diǎn)1-6,還包括8-12)抑制能力較差,比水提物差7.4倍;(2)部分4的抑制力最強(qiáng)(主要為斑點(diǎn)13),其50%抑制量為8ug/ml,比茶堿強(qiáng)32倍,脂溶性丹參酮ⅡA磺酸鈉對兔腦CAPD無抑制效應(yīng)。
以上結(jié)果表明,丹參水溶性成分具有抑制體外CAPD的作用,且對不同組織具有特異性。所以丹參的作用機(jī)制可能部分通過改變體內(nèi)CAPD的活性,從而改變cAMP水平以調(diào)節(jié)代謝過程。
13.對中樞神經(jīng)的作用:13.1.丹參水提液對小鼠自主活動的影響:動物均為瑞士種小白鼠,雄性,體重為17-26g,僅給水合氯醛的動物,實(shí)驗(yàn)的前一夜停食供水,其余動物均不禁食。用Tainter的方法求半數(shù)睡眠劑量(SD50)。所用丹參制劑是水提乙醇沉淀后的上清液。使用時(shí)用生理鹽水稀釋成所需濃度,并調(diào)至pH7。丹參劑量均按g/kg計(jì)。苯丙胺、氯丙嗪、眠爾通、戊巴比妥、巴比妥和丹參均腹腔注射給藥,水合氯醛為口服給藥。實(shí)驗(yàn)表明,丹參能明顯抑制小鼠自主活動,作用與劑量大小成正比與眠爾通和氯丙嗪合用能增強(qiáng)抑制效果。
13.2.丹參合并應(yīng)用催眠藥對小鼠睡眠的影響:給予小鼠巴比妥125mg/kg或150mg/kg,注射后30分鐘再注射丹參。注射丹參后15-30分鐘,再給水合氯醛250mg/kg,或戊巴比妥鈉25mg/kg。丹參按不同劑量合并應(yīng)用。結(jié)果單獨(dú)給藥與合并給藥組均有非常顯著的差異。為了進(jìn)一步觀察丹參與戊巴比妥鈉的協(xié)同作用,一組小鼠單獨(dú)給戊巴比妥鈉,求SD50,另一組小鼠先給丹參10g/kg,再注射戊巴比妥鈉,觀察劑量-反應(yīng)線的移動。結(jié)果丹參使戊巴比妥鈉的SD50由38.5mg/kg,降至21.6mg/kg。丹參增強(qiáng)戊巴比妥鈉的作用與劑量相關(guān),丹參2.5g/kg和5g/kg,使戊巴比妥鈉150mg/kg組動物的睡眠百分率由20%分別提高到40%和90%。戊巴比妥鈉的劑量降低到125mg/kg,丹參的增強(qiáng)作用亦非常明顯。給小鼠水合氯醛250mg/kg,動物均處于清醒狀態(tài)。若與丹參合并應(yīng)用,水合氯醛的中樞抑制作用顯著增強(qiáng),并且這種增強(qiáng)作用與丹參的劑量成正比。
13.3.丹參對抗士的寧的驚厥作用:實(shí)驗(yàn)方法同上,注射丹參30-60分鐘后,由小白鼠尾靜脈注射咖啡因,戊四唑,士的寧和-葉荻堿,容積不超過0.1ug/kg體重,用上下法求半數(shù)驚厥劑量(CD50),結(jié)果抗驚作用不明顯,但對苯丙胺的精神運(yùn)動興奮作用卻有明顯的對抗作用。古代文獻(xiàn)記載丹參有養(yǎng)陰定志,益氣解煩是有一定道理的。
13.4.丹參對貓丘腦后核內(nèi)臟放電的影響:2.5-3kg貓19只,雌雄不拘,在氯醛醣淺麻(60mg/kg)下,氣管切開插管以備人工呼吸。按文獻(xiàn)135方法制成模型。在貓清醒狀態(tài)下。注射三磺季銨酚(5mg/kg)使動物無動化,人工呼吸,體溫保持在36-39℃條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。首先用較強(qiáng)單一或雙脈沖刺激內(nèi)臟大神經(jīng)于P區(qū)內(nèi)尋找產(chǎn)生內(nèi)臟大神經(jīng)誘發(fā)放電的單位,找到后按1.4-9g/kg的不同劑量靜脈注射丹參注射液,每隔3分鐘刺激一次內(nèi)臟大神經(jīng),觀察丹參注射前后P發(fā)放電的變化。結(jié)果表明,丹參能抑制丘腦后核內(nèi)臟痛放電,但直接作用于神經(jīng)干不能阻斷其神經(jīng)興奮傳導(dǎo)、表明其鎮(zhèn)痛作用是中樞性的。
另有報(bào)道,清醒兔靜脈注射丹參4.5g/kg后10-30分鐘,大腦皮層的自發(fā)電活動明顯減少。120分鐘才恢復(fù)。用較強(qiáng)的電刺激重復(fù)刺激兔大腦皮層,可以引起節(jié)律性的電活動,停止刺激后,電活動往往還可以延續(xù)數(shù)秒至數(shù)十分鐘(即后發(fā)放)。靜脈注射丹參后,電刺激引起后發(fā)放的閾值明顯升高,約50分鐘后恢復(fù)。用氯醛糖和脲酯麻醉的兔,刺激一側(cè)大腦皮層體感覺運(yùn)動區(qū),在對側(cè)皮層對稱點(diǎn)單極記錄,得到一個(gè)大體上是先正后負(fù)的電反應(yīng),在刺激電極下或記錄電極下局部給丹參,都可使電反應(yīng)增大;由靜脈注射給藥,則電反應(yīng)的增大更為明顯。當(dāng)靜脈注射小劑量丹參時(shí),沒有出現(xiàn)明顯的作用,大劑量時(shí)才產(chǎn)生壓抑作用,以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,丹參能使大腦皮層自發(fā)電活動振幅減小,重復(fù)刺激引起后發(fā)放閾值升高,單刺激大腦皮層出現(xiàn)的重復(fù)電反應(yīng)減少,在大腦皮層電活動振幅減h,對較高頻率的組分無明顯增加,所以此電活動減小不是去同步的結(jié)果。丹參具有抑制體外試驗(yàn)中各組織的環(huán)腺苷酸磷酸二酯酶的活力,尤以大腦和肺和抑制最為敏感,推測大腦皮層的抑制作用,可能是通過抑制環(huán)腺苷酸二酯酶的活力,增加環(huán)腺苷酸水平而實(shí)現(xiàn)的。
14.性激素樣作用:14.1.丹參酮的雌激素樣活性:體重11-12g雌性幼齡小鼠,隨機(jī)分成四組,每組10只。用3%淀粉糊將藥物配成2%總丹參酮淀粉懸液,第1組l日兩次灌胃給藥,每次0.2ml;第2組1日l次;對照組以3%淀粉糊0.2ml每天灌胃l次;陽性對照組皮下注射雌二醇0.25ug,連續(xù)給藥3日,第4日將小鼠斷頸處死,取出子宮。剔去脂肪組織,用組織天平稱子宮重量,結(jié)果給藥組子宮重量明顯高于對照組,丹參酮每天給藥兩次比給藥1次的效果明顯,但其雌激素樣活性比雌二醇弱。
另取22-24g成年雌性小鼠60只,切除雙側(cè)卵巢,3日后分組以2%丹參酮淀粉懸液,每天灌胃兩次,每次0.5ml,對照組給相當(dāng)量的3%淀粉糊,陽性對照組皮下注射雌二醇,每鼠0.25ug,連續(xù)給藥3日,第4日將小鼠斷頸處死,取子宮稱重,結(jié)果丹參酮組的小鼠子宮重量與對照組相似,而給雌二醇的小鼠子宮重量明顯增加,由此可見丹參酮的雌激素樣活性與雌二醇的作用有所不同,前者需通過卵巢才起作用。成年雌鼠灌胃給予丹參酮后,陰道殘片出現(xiàn)動情期變化,亦證明其具有雌性激素樣的活性。
14.2.丹參酮的抗雄激素活性:將體重50-60g雄性大鼠切除雙側(cè)睪丸,手術(shù)后第5日隨機(jī)分成4組,每組7只。丹參酮組以2%丹參酮淀粉懸液灌胃,1日2次,每次10ml;對照組給相當(dāng)量的3%淀粉糊,丙酸睪丸酮加丹參酮組兩種藥物同時(shí)給劑量同上,連續(xù)給藥5日,第6日處死動物,取精囊及前列腺稱重,以精囊、前列腺重/100g體重表示,結(jié)果見表28,丙酸睪丸酮組的精囊和前列腺的重量均明顯高于其他3組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說明丹參酮確有抗丙酸睪丸酮的作用。
15.炮制品的藥理作用:丹參傳統(tǒng)的炮制方法有酒炒、醋炒及生用等,為探討不同炮制方法對藥效的影響,實(shí)驗(yàn)以對由四氯化碳所致家兔急性肝損傷模型進(jìn)行了觀察。取健康雄性家兔30只,體重2-2.5kg,隨機(jī)分為對照組,生品丹參治療組、酒炒丹參治療組、醋炒丹參治療組等4組;由家兔心臟采血,測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT),隨即皮下注射四氯化碳1次(0.5ml/kg),次日各治療組灌胃丹參煎劑(5ml/kg),每天1次,連續(xù)用藥6日,對照組灌胃煮沸后放冷的自來水,用法同給藥組,停藥次日再次取血測SGPT,立即處死,剖驗(yàn)檢查肝臟,并用10%福爾馬林固定。組織切片用蘇木素伊紅染色。部分切片作蘇旦IV脂肪染色。顯微鏡觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)束除去實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)意外事故的3只,僅余27只動物供分析。結(jié)果動物注射四氯化碳后,肝臟出現(xiàn)不同程度的中毒性肝炎病變,小葉中央靜脈不同程度擴(kuò)張充血,肝細(xì)胞腫脹變性,點(diǎn)狀或灶狀壞死,炎細(xì)胞浸潤,從表34看出,用藥組與對照組比,都有不同程度減輕肝損傷的作用,以等級序列檢驗(yàn),生品及酒炒丹參可明顯減輕細(xì)胞壞死(P<0.05和P<0.01)。鏡下可見肝細(xì)胞壞死少,細(xì)胞變性輕,肝竇顯露,炎細(xì)胞浸潤少。而對照組與醋炒組肝細(xì)胞變性壞死較重,部分動物肝小葉中心空虛,中央靜脈擴(kuò)張充血,四周圍殘留擴(kuò)張的肝竇及增生的吞噬細(xì)胞。動物注射四氯化碳后血清SGPT都不同程度升高,對照組增高尤為顯著,治療組增高較少,各治療組與對照組相比,僅生品組和酒炒組差異顯著(P<0.05)。治療組間比較,酒炒與生用無明顯差異(P>0.05)。提示酒炒和醋炒丹參與生品相比,療效并未提高。這對今后臨床使用丹參炮制品提示疑義,值得進(jìn)一步研究。
【毒性】
丹參煎劑給小鼠腹腔注射43g/kg,48小時(shí)l次腹腔注射內(nèi)未見動物死亡,而64g/kg組10只動物死亡2只。丹參水提醇溶部分,小鼠1次腹腔注射的半數(shù)致死量為80.5±3.1g生藥/kg,丹參或復(fù)方丹參注射液,小鼠腹腔注射的半數(shù)致死量分別為136.7±3.8g/kg和61.5g±5.3g/1g。(以生藥含量計(jì))
具有活血祛瘀,通經(jīng)止痛,清心除煩,涼血消癰之功效。用于胸痹心痛,脘腹脅痛,瘕瘕積聚,熱痹疼痛,心煩不眠,月經(jīng)不調(diào),痛經(jīng)經(jīng)閉,瘡瘍腫痛。
健客價(jià): ¥25調(diào)節(jié)血脂、耐缺氧。
健客價(jià): ¥368活血祛瘀,通經(jīng)止痛,清心除煩,涼血消癰。用于胸痹心痛,脘腹脅痛,瘕瘕積聚,熱痹疼痛,心煩不眠,月經(jīng)不調(diào),痛經(jīng)經(jīng)閉,瘡瘍腫痛。
健客價(jià): ¥49抗菌消炎。用于痤瘡,扁桃腺炎,外耳道炎,癤,癰,外傷感染,燒傷感染,乳腺炎,蜂窩組織炎,骨髓炎等。
健客價(jià): ¥36請按產(chǎn)品說明書或在醫(yī)師指導(dǎo)下購買和使用。
健客價(jià): ¥60抗菌消炎。用于痤瘡、扁桃腺炎、外耳道炎、癤、癰、外傷感染、燒傷感染、乳腺炎、蜂窩組織炎,骨髓炎等。
健客價(jià): ¥24活血化瘀,理氣止痛。用于胸中憋悶,心絞痛。
健客價(jià): ¥20.5活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥9.9活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥27.5活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述癥候者。
健客價(jià): ¥12活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥6活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹心痛,癥見胸悶、胸痛,心悸氣短;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥36活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶,心前區(qū)刺痛,冠心病,心絞痛見上述癥候者。
健客價(jià): ¥8活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥8.7活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥44活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥10.8活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥16抗菌消炎。用于痤瘡,扁桃腺炎,癤。
健客價(jià): ¥41活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥9.5活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述癥候者。
健客價(jià): ¥6.6活血化瘀。用于心血瘀阻型胸痹的輔助治療,可緩解胸悶、心痛、心悸。
健客價(jià): ¥585活血化瘀,鎮(zhèn)靜安神。用于冠心病引起的心絞痛,胸悶及心悸等。
健客價(jià): ¥35活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥8.5活血化瘀,理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹心痛,癥見胸悶﹑胸痛﹑心悸氣短;冠心病心絞痛見上述證候者。
健客價(jià): ¥39