HBV分子病毒學研究中常用的幾種肝細胞（系）

2018-07-28 來源：中國病毒學論壇標簽：掌上醫(yī)生喝茶減肥一天瘦一斤安全減肥 cps聯盟美容護膚

摘要：最經典的肝癌細胞系之一，大約30多年前分離自一位15歲美國白人男孩的肝癌組織，形態(tài)為上皮細胞，極性細胞；乙肝表面抗原陰性，對G418有抗性。

1.HepG2

最經典的肝癌細胞系之一，大約30多年前分離自一位15歲美國白人男孩的肝癌組織，形態(tài)為上皮細胞，極性細胞；乙肝表面抗原陰性，對G418有抗性。由ATCC收錄。主要特點是可以大規(guī)模培養(yǎng)，對除ViralEntrystep之外的HBVlifecycle支持度好，是研究HBV基因表達/病毒復制的重要模型。缺點是培養(yǎng)時容易成團疊層成菌落狀，最好先用collagen處理培養(yǎng)瓶/皿。

2.Huh-7

1982年（也是大約30年前）分離自一位57歲日本男性的肝癌組織。上皮樣細胞，但為非極性細胞（2D培養(yǎng)下），乙肝表面抗原陰性。由JCRBCellBank收錄。優(yōu)點類似HepG2細胞，相比更易于培養(yǎng)，且轉染效率更高，瞬時轉染HBV表達質粒后上清中可收獲10^6-10^7copies/ml的病毒顆粒。缺點是該細胞未被ATCC收錄，市面上存在不少亞克隆，來源不單一，導致不同實驗室的來源不同的Huh-7細胞株上的結果很可能無法直接比較。

3.HepG22.2.15

1987年由西奈山醫(yī)學院的研究人員構建（作者之一是中國人Mei-LingCHEN）。通過轉染將兩對“頭尾相接”的HBV基因組dimer整合入HepG2細胞基因組。該細胞系在分化培養(yǎng)條件下可以產生高滴度的HBV感染性顆粒（~10^8copies/ml）,同時核內可檢測到cccDNA的存在（盡管含量很低），一直是抗HBV藥物篩選的重要細胞模型。缺點是該細胞系太過古老且缺乏原始種子庫，導致在連續(xù)培養(yǎng)快三十年后，其細胞生物學特性和祖細胞HepG2差異很大，缺乏合適的對照，無法作為功能基因研究的合適模型了。

考慮到這一問題，美國和德國的相關研究人員基于HepG2又各自建立了另外兩種新細胞系：HepAD38和HepG2H1.3。前者包含1.1拷貝的整合HBV基因組，其表達由誘導型CMV-tet啟動子調控，病毒產量甚至高于HepG22.2.15，分化培養(yǎng)所需時間也較短。后者包含1.3拷貝的整合HBV基因組，使用HBV自身的啟動子，相對比較接近體外感染過程中/后的HBV-CellInteraction，適合用于HBV相關功能基因（組）的研究。

4.PHH（primaryhumanhepatocytes）

人原代肝細胞體外分離培養(yǎng)技術，由德國科學家于2003年建立。作為原代細胞，自然有著任何腫瘤細胞系所無法匹敵的優(yōu)點，能夠被HBV直接感染，接近自然感染過程中生理學生物學指標，是目前最為可靠的體外感染模型。利用灌流技術從手術切除的患者正常肝組織中分離PHH，目前技術上已經相當成熟，但操作上仍比較復雜，對肝源質量和培養(yǎng)條件要求苛刻，細胞本身無法傳代，生命周期有限，尤其考慮其細胞來源的特殊性，顯然是無法規(guī)模化推廣的，僅限于少數實驗室的“奢侈品”。

5.HepaRG

由法國科學家于2002年建立，是一種具有定向分化潛力的肝臟祖細胞，在體外分化培養(yǎng)條件下可以定向分化為具有肝細胞和膽管細胞功能及特征的細胞。分化后的HepaRG細胞在形態(tài)和功能上和PHH非常接近，是目前唯一可以被HBV體外感染的非腫瘤細胞系，具備包含Viralentrystep在內的完整HBVlifecycle，應該說是HBV病毒學研究及新藥篩選的最佳工具。

HepaRG細胞的主要缺點是，對培養(yǎng)條件要求非常嚴格，且細胞需要連續(xù)培養(yǎng)并分化大約4周，之后如果一切無誤方能用于HBV感染實驗。此外，即便是有經驗的研究人員提供了最理想的培養(yǎng)條件，HBV在HepaRG上的感染效率也只有大約10-15%（即便是PHH也同樣如此），復制水平遠沒有基于質粒轉染來的高，這也正是目前體外感染實驗的瓶頸所在。另有研究表明，HepaRG感染HBV之后的cccDNA水平較低，未能檢測到顯著的rcDNA-cccDNArecycling，其原因還有待進一步的探索。

6.L02

非腫瘤的正常人肝細胞株（也有資料說是人胚胎肝細胞株，不能確定）。很可惜從來沒有用過這個細胞株，也未能查到該細胞具體的來源信息，希望有知情的朋友可以幫忙補充。目前國外使用L02細胞用于HBV相關研究的報道還不多見，主要還是來自國內的研究團隊。作為一種區(qū)別于HepG2/HuH-7等腫瘤細胞的正常肝細胞株，在某些特定的研究背景下，L02會有其獨特的優(yōu)勢。如何被國際同行所認可，可能是該細胞被廣泛運用的前提。

7.HepG2-NTCP/HuH7-NTCP

由北京生命科學研究所成功鑒定出了HBV功能性受體NTCP。此項研究的核心成果及應用之一，就是過表達NTCP的HepG2/HuH7細胞，可以成功被HBV感染（效率類似PHH/HepRG細胞）！簡單方便，任何實驗室都可以很容易的重復，相信類似的細胞系會得到非常廣泛的運用。