萬(wàn)氏牛黃清心丸的主要成分是牛黃10g，朱砂60g，黃連200g，黃芩120g，梔子120g，郁金80g。主要用于治療流行性乙型腦炎，麻疹病毒性腦炎，麻疹后并發(fā)支氣管性肺炎，百日咳并發(fā)腦膜腦炎等。那么，萬(wàn)氏牛黃清心丸的測(cè)定方法是怎樣？

1、方法名稱：萬(wàn)氏牛黃清心丸—黃連的測(cè)定—薄層掃描法

應(yīng)用范圍：該方法采用薄層掃描法測(cè)定萬(wàn)氏牛黃清心丸中黃連的含量。

該方法適用于萬(wàn)氏牛黃清心丸中黃連的測(cè)定。

方法原理：供試品經(jīng)鹽酸-甲醇（1：100）加熱回流，過(guò)濾，用甲醇定量制成供試液，點(diǎn)樣，以苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2）為展開(kāi)劑，在另槽中加入等體積的濃氨試液，預(yù)平衡15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，照薄層色譜掃描法進(jìn)行熒光掃描，激發(fā)波長(zhǎng)λ=366nm，測(cè)量供試品熒光強(qiáng)度的積分值與對(duì)照品熒光強(qiáng)度的積分值，計(jì)算其含量。

試劑：鹽酸、甲醇、乙酸乙酯、異丙醇、苯

儀器設(shè)備：薄層掃描儀、點(diǎn)樣器（一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材）、展開(kāi)室（可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉）。

2、材料：玻板（用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干）。吸附劑（硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。）

試樣制備：A、對(duì)照品溶液的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL各含0.02mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。B、供試品溶液的制備：取裝量差異項(xiàng)下該品適量，剪碎，取適量，精密稱定，精密加入等量的硅藻土，研勻，精密稱取約1.6g，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1：100）混合液適量，加熱回流提取至提取液無(wú)色，提取液移至100mL量瓶中，用少量鹽酸-甲醇（1：100）混合液洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加混合液至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

3、操作步驟：A、薄層板制備：將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm）取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

B、點(diǎn)樣：精密吸取供試品溶液4μL、對(duì)照品溶液2μL與6μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

C、展開(kāi)：將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中，以苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2）為展開(kāi)劑，在另槽中加入等體積的濃氨試液，預(yù)平衡15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，取出，晾干。

D、含量測(cè)定：在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，用雙波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λS=510nm，λR=700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過(guò)原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過(guò)原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

溫馨提示：如在用藥過(guò)程有任何不良反應(yīng)或疑惑，可向方舟健客在線醫(yī)生咨詢，熱線電話:400-086-5111。

（實(shí)習(xí)編輯：葉思敏）